采用GS115酵母菌合成重组人肠三叶因子的工艺

摘要

本发明涉及基因工程的DNA或RNA、载体和质粒，或其分离、制备或纯化。是一种采用GS115酵母菌合成重组人肠三叶因子的工艺：包括目的基因的获取、酵母表达载体的构建、酶切及测序鉴定、转化入GS115酵母菌、诱导表达和纯化六步过程。按照本发明表达方法获得的重组人肠三叶因子，表达产量可达100mg/L，提纯纯度可达95％或更高，纯化的蛋白产物经检测结果表明：用本发明表达方法获得的重组人肠三叶因子为高纯度、无热源、无内毒素，有正确的分子量，与天然的肠三叶因子有相同的等电点、氨基酸序列和紫外光谱，及其完好的生物学活性的重组蛋白。它在治疗由各种致伤因子引起的胃肠粘膜损伤等方面具有显著效果。

主权项

1、一种采用GS115酵母菌合成重组人肠三叶因子的工艺，包括目的基因的获取、酵母表达载体的构建、酶切及测序鉴定、诱导表达和纯化过程，其特征是在酶切及测序鉴定之后还有一个转化入GS115酵母菌的过程：将重组质粒线性化，然后化学转化入GS115酵母菌，再进行抗性筛选，将筛选出的阳性克隆分别转接到MMH、MDH平板上获得阳性克隆Mut+表型。