一种筛选抗烟草黑胫病放线菌的方法

摘要

本发明涉及一种筛选抗烟草黑胫病放线菌的方法，属植物保护技术领域。本方法包括菌丝生长速率法初筛活性菌株、离体叶片法复筛出活性菌株步骤，及温室盆栽活体试验验证步骤。首先用菌丝生长速率法，初筛出对烟草黑胫病菌Phtophthro nicotinae Bredade Hann菌丝生长抑制率大于70％的放线菌发酵液提取物；再对菌丝生长速率法得到的提取物，用离体叶片法和温室盆栽烟苗复筛其对烟草黑胫病的防治效果，筛选出应用前景好的抗烟草黑胫病放线菌。本方法筛选到的具有较好抗烟草黑胫病活性的放线菌菌株，入选菌株在抗烟草黑胫病的离体及活体筛选模型上均具有较好活性，为追踪分离活性化合物提供了可靠结果。本方法还具有简便、操作、易有效地筛选出防治烟草黑胫病的放线菌等优点。

主权项

1、一种筛选抗烟草黑胫病放线菌的方法，包括菌丝生长速率初筛活性菌株、离体叶片法复筛出活性菌株步骤，其特征在于该方法还包括温室盆栽活体试验验证步骤：其中：(1)菌丝生长速率初筛活性菌株步骤中：所用的烟草黑胫病菌株从烟草病株上分离出，用V8汁培养基和燕麦培养基培养，25℃保存备用；将Φ5mm的烟草黑胫病菌菌丝块接种于已带发酵液提取物的V8汁培养基中，菌丝块沿培养皿周缘放置，每皿放置4块，每处理3重复，置于28℃培养箱中，黑暗培养7天后观察记录，分析抑菌效果，初步筛选出对烟草黑胫病菌(Phtophthro nicotinae Breda de Hann)菌丝生长抑制率大于70％的活性菌株；(2)离体叶片法复筛出活性菌株步骤中：剪取长势均匀一致的叶片，喷施丝生长速率初筛活性菌株步骤中得到的活性菌株发酵液提取物，晾干后，置于铺有湿纱布的塑料盘内，用0.5cm的菌饼针刺创伤接种8块/叶；然后放置于保温保湿接种箱内，每处理3片叶；设清水为空白对照，待空白对照发病后观察记录，计算防治效果，复筛出对烟草黑胫病防治效果大于70％的活性菌株；(3)温室盆栽烟苗验证步骤为：将在V8汁培养基培养10d的烟草黑胫病菌种连同培养基一起切碎，与蛭石充分混匀，装入纸杯内，移植长至4-5叶期的烟苗，每杯2株，3重复/处理；加入经离体叶片法复筛出的活性菌株发酵液提取物，5mL/杯；然后置于28℃培养箱中保湿培养；设空白对照处理，加灭菌水，接种培养5天后，检查烟苗发病情况，计算病情指数及相对防治效果，筛选出抗烟草黑胫病放线菌有防治效果的放线菌菌株。