高中和活性抗肿瘤坏死因子单克隆抗体的可变区基因及其制备

摘要

本发明公开了一种高中和活性抗肿瘤坏死因子(TNF)单克隆抗体(D2 mAb)的可变区基因的制备方法。用重组人TNF免疫BALB/c小鼠，制备一组小鼠抗人TNF单克隆抗体。通过体外阻断实验，从中筛选出具有高中和活性的抗人TNF单克隆抗体。克隆该单克隆抗体重链可变区基因，获得该单克隆抗体重链可变区基因序列和氨基酸序列，确认该基因序列和蛋白序列的惟一性。本发明选用高中和活性D2杂交瘤细胞株，成功的从其中克隆出重链可变区基因，测序后，得到其独特的核苷酸序列，编码该可变区的基因序列在构建对炎症、自身免疫性疾病等有治疗作用的嵌合抗体和人源化抗体等方面有巨大的潜在价值。

主权项

1.一种高中和活性抗肿瘤坏死因子单克隆抗体的可变区基因，其特征在于，基因序列和氨基酸序列如下：342 ctgcagcagtctgggactgtgctggcaaggcctgggacttccgtg L Q Q S G T V L A R P G T S V297 aagatgtcctgcaaggcttctggctacaacttcaccagctactgg K M S C K A S G Y N F T S Y W 252 atgcactgggtaaaacagaggcctggacagggtctagaatggatt M H W V K Q R P G Q G L E W I207 ggtgctctttttcctggaaacagtgatacgacctacaaggagatg G A L F P G N S D T T Y K E M 162 ttgaagggcagggccaaactgactgcagccacatccgccagtatt L K G R A K L T A A T S A S I117 gcctacttggagttcagcagcctgacaaatgaggattctgcggtc A Y L E F S S L T N E D S A V 72 tattactgtgcaagaggcgatttcggcgctat ggactactggggc Y Y C A R G D F G A M D Y W G 27 caagggaccacggtcaccgtctcctca 1 Q G T T V T V S S