一种重组蛋白的高效变复性的方法

摘要

本发明涉及一种重组蛋白的高效变复性的方法，对重组表达而不具有生物活性的蛋白质进行了高效快速的变复性。通过采用含有尿素和一定浓度比例的氧化还原剂GSSH/GSH等组成的变性缓冲液对充分洗涤后的包涵体蛋白进行溶解，随后将变性蛋白稀释注入含有L－精氨酸和一定浓度比例的氧化还原剂GSSH/GSH等组成的复性缓冲液中进行复性，并在复性过程中逐步提高缓冲液中氧化还原剂GSSH/GSH的比例及调低pH，直至复性结束。经该方法复性的几种在大肠杆菌中表达并形成包涵体的蛋白质，其生物活性强且稳定，因此是工业化高效变复性的方法。

主权项

1.一种重组蛋白的高效变复性的方法，其特征在于不同的蛋白质复性阶段使用了含有不同pH值与不同浓度和比例的还原剂/氧化剂所组成的复合动态缓冲液，这种方法的步骤包括：(1)使用pH值为10.0以上的变性缓冲液溶解重组蛋白，且缓冲液中含有2.0mM以上的还原剂；(2)加入复性缓冲液，使得到的溶液pH值比步骤(1)所得到溶液的pH值降低了0.5~1.0，而且使氧化剂浓度比步骤(1)中的氧化剂浓度增加100~300％，还原剂浓度比步骤(1)中的还原剂浓度降低50％~100％；(3)调节复性缓冲液，使得到的溶液pH值比上一步骤得到溶液的pH值降低了0.2~0.5，而且使氧化剂浓度比上一步骤的氧化剂浓度增加50~100％，还原剂浓度比上一步骤中的还原剂浓度降低50％~100％；(4)重复步骤(3)若干次，使每一步所得的溶液的pH值都比上一步的溶液的pH值降低0.2~0.5，而且使氧化剂浓度比上一步骤的氧化剂浓度增加50~100％，直至最终溶液的pH值接近中性或者该重组蛋白质的生理值并使氧化剂的终浓度为1~100mM。