从牛胎盘分离纯化免疫调节活性多肽的方法

摘要

本发明提出将牛胎盘作为一类新的胎盘资源，清洗切块、匀浆抽提、离心沉淀分离、上清液经超滤、纳滤脱盐、冷冻干燥得到含有活性免疫调节活性多肽基础产品；在经过阴离子交换层析、凝胶排阻层析、反相高效液相层析几步分离纯化，透析冻干得到提纯的成品。本发明与传统的免疫调节因子的研究相比，明确了传统的免疫调节因子中起活性功能的成分多肽，纯化程度不同的免疫调节活性多肽能够满足不同行业的需求。离子交换层析和凝胶排阻层析后得到的免疫调节活性多肽为研制具有免疫调节活性的保健食品提供了丰富的原料。反相高效液相层析后得到的纯度90％以上的免疫调节活性多肽，生物活性可达到药用标准。

主权项

1、从牛胎盘分离纯化免疫调节活性多肽的方法，其特征在于它是经过如下步骤实现的：A、新鲜牛胎盘处理：清洗切块，加两倍(W/V)的磷酸盐缓冲液匀浆，离心沉淀分离，上清液经1万分子量截留超滤、纳滤脱盐、冷冻干燥；B、阴离子交换层析：取30mg步骤A的冻干粉，溶于5ml pH7.4的20mmol/LNa2HPO4-NaH2PO4缓冲液中，上样到2.6×35cm的Sepharose CL-6B阴离子交换柱上，流速为1mL/min，淋洗液A液为20mmol/L的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液，B液为A液中加入1.0mol/L氯化钠的溶液，梯度洗脱得到含有活性多肽的组分1a；C、凝胶排阻层析：将步骤B收集到的组分1a直接上到1.0×75cm的Sephadex G-25柱上，流动相为用20mmol/L，pH7.4的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液，流速为10mL/h，等度洗脱，得到含有活性多肽的组分1b；D、反相高效液相层析：将步骤C收集到的组分1b直接上到Sephasil C18 柱上，流速为1mL/min，流动相为A液选用加入0.05％三氟乙酸的5-10％乙腈，B液选用加入0.05％三氟乙酸的40-60％的乙腈，梯度洗脱，得到含有活性多肽的组分4；E、对步骤D纯化的组分4检测，脱盐、冻干即可。