一种建立昆虫细胞系的方法

摘要

本发明涉及建立昆虫细胞系的方法，包括：将昆虫浸没在乙醇溶液中，用无菌蒸馏水清洗昆虫，吸干虫体表面；解剖昆虫，取出需要建立细胞系的完整昆虫组织或器官；分别用生理盐水和细胞培养液清洗昆虫组织或器官，放入无光照的细胞培养箱中培养；加入细胞培养液培养；并不断吸出和换入半量的细胞培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶；把含有新增殖出的单个细胞，连同全部的细胞培养液吸出放入新培养瓶中，加入新的细胞培养液，而原含有组织块的培养瓶中再加入同吸出量同样多的新的细胞培养液，两个培养瓶放入培养箱中培养至细胞系建立初步成功。该方法将能在短期内快速、可重复地建立多种昆虫的细胞系，所需的昆虫细胞培养设备简单，可操作性强。

主权项

1.一种建立昆虫细胞系的方法，包括如下步骤：(1)将实验昆虫浸没在乙醇溶液中10-60分钟，进行表面消毒，然后用无菌蒸馏水清洗昆虫，再吸干虫体表面；(2)解剖昆虫，取出需要建立细胞系的完整昆虫组织或器官；(3)用生理盐水清洗(2)中获得的组织或器官2-3次，再用细胞培养液清洗，清洗后把该组织或器官放入细胞培养瓶中，盖紧瓶盖，放入25-29℃无光照的细胞培养箱中培养4-24小时；(4)加入适量的细胞培养液，使组织块完全或大部分浸没在该培养液中，在与步骤(3)同样条件下培养；(5)每5-7天吸出半量的细胞培养液，并同时换入半量新的细胞培养液，直至观察到不断扩展并开始增殖的细胞充满了整个培养瓶；(6)把含有新增殖出的单个细胞，连同全部的细胞培养液吸出放入新培养瓶中，并加入新的细胞培养液，而原含有组织块的培养瓶中再加入同吸出量同样多的新的细胞培养液，两个培养瓶放入培养箱中培养，细胞开始传代，细胞系建立初步成功；整个过程都是在无菌条件下进行的。