一种红藻和蓝藻完整藻胆体的稳定化技术

摘要

蓝藻和红藻完整藻胆体的稳定化技术，属于海洋生物技术领域。本发明以红藻和蓝藻为材料，应用超声波破碎细胞、去污剂TritonX－100从类囊体膜上解离藻胆体、常规离心去除TritonX－100、叶绿素和细胞碎片、应用蔗糖密度梯度超速离心制备完整藻胆体，然后应用多糖葡聚糖非共价键包被和甲醛共价交联两种方法，对藻胆体的完整性进行保护，室温下保存30天，藻胆体依然保持完整，没有解离。从而为将藻胆体应用于超灵敏的生物医学检测奠定了基础。

主权项

1.蓝藻和红藻完整藻胆体的稳定化技术，方法如下：(1)原料的破碎：以新鲜的蓝藻或红藻为原料，溶于pH＝6.8～7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液中，采用超声波破碎细胞；(2)藻胆体解离：在上述破碎的藻体中加入去污剂吐温X-100，使藻胆体从类囊体膜上解离下来，离心，去除去污剂、叶绿素和破碎的细胞，得藻胆体的粗提物；(3)完整藻胆体的提取：以蔗糖密度梯度高速离心的方法提取制备上述蓝藻或红藻的完整藻胆体。(4)完整藻胆体的稳定性保护采用下列方法之一：①采用葡聚糖，对藻胆体非共价交联，准确称量相对分子质量为20000的葡聚糖，加入到上述步骤3完整藻胆体溶液中，溶解，使终浓度达9～10％W/V；②采用甲醛交联技术，对藻胆体分子内进行共价交联，取上述步骤3完整藻胆体溶液，用0.75mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液pH＝6.98，调整蛋白浓度至0.25～0.30mg/mL，然后，取该藻胆体溶液1.8mL，边振荡边缓慢滴加用0.75mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液配制的3～5％W/V甲醛浓溶液0.2mL，直至甲醛浓度为0.3～0.5％W/V，20℃保温12-13h。