季戊四醇衍生物为核的树枝状高分子基因载体的合成方法

摘要

本发明涉及树枝状高分子基因载体的制备技术，特别是通过设计新的核分子，合成出活性基团数目是旧核产物三倍的树枝状高分子。其技术方案是利用三羟甲基氨基甲烷，经过简单有机反应后，与季戊四醇－四元酰氯衍生物形成新的核分子季戊四醇－十二元胺。由新核合成出的各代高分子与旧核各代产物相比，表面电荷密度及活性胺端基数目增加了三倍，有利于获得更高的基因转移效率。这类高分子表面富含胺基，能与负电性的DNA结合成纳米超分子复合物，可作为基因载体将质粒DNA转入细胞。细胞转染试验说明，其效率与常用的脂质体基因转移试剂相当，但细胞毒性远小于后者，成本低廉，可大量生产，且该方法可大大缩短反应和纯化时间，提高效率，有很好的应用前景。

主权项

1.一种季戊四醇衍生物为核的树枝状高分子基因载体的合成方法，采用：季戊四醇经过四步反应，生成活泼的季戊四醇-四元酰氯衍生物(A)；三羟甲基氨基甲烷(Tris)经过两步反应，产生Tris-三元甲酯衍生物(B)，其特征在于：1)使A与B反应，得到季戊四醇-十二元酯衍生物7；2)使7在甲醇中与过量的乙二胺反应，酯胺解得到枝状核分子季戊四醇-十二元胺(C)；3)以C为核，在甲醇中与丙烯酸甲酯进行Michael加成，得到具有酯端基的半代产物，经提纯后与大大过量的乙二胺进行酯胺解反应，便可得到具有胺端基的整代树枝状高分子；4)重复3)的操作，最终获得五代树枝状高分子PDA-PAMAM5.0G；5)分别利用硅胶柱和凝胶柱分离半代酯端基和整代胺端基产物，纯化各反应步骤的产物。