Celle-baserte fluorescens-resonans energi overforings (FRET)-analyser for Clostridietoksiner

摘要

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte for bestemmelse av Clostridietoksin-aktivitet ved (a) kontakte med en prøve, en celle inneholdende et Clostridietoksin-substrat som omfatter en donor-fluorofor; en akseptor med et absorbansspektrum som overlapper emisjonsspekteret for donor-fluoroforen; og en Clostridietoksin-gjenkjennelsessekvens som inneholder et kløyvingssete som intervenerer mellom donor-fluoroforen og akseptoren, hvor resonans energioverføring fremvises mellom donor-fluoroforen og akseptoren under passende betingelser; (b) eksitere donor-fluoroforen; og (c) bestemme resonans energi-overføring for den kontaktede cellen relativt til en kontrollcelle, hvor en forskjell i resonans energi-overf øring for den kontaktede cellen sammenlignet med kontrollcellen er indikativ for Clostridietoksin-aktivitet.