发明名称 |
收集以及使用细胞核mRNA的方法 |
摘要 |
常规基因表达系统和纯化方法目标集中于整个细胞中存在的mRNA。因此,其结果显示为新转录mRNA以及消化mRNA的总和。因此,以前难以在mRNA正在消化的情况下检测新mRNA的表达。而且,当已经存在大量mRNA时,难以检测mRNA量的微小变化,因此敏感性低。已证实新合成的mRNA位于细胞核中,集中于这一事实开发了一种新方法。将细胞捕获在膜上,并用细胞膜透化溶液如NP-40处理,由此增加细胞膜的通透性。在洗去胞质后,用细胞溶解液溶解细胞核,然后由因此获得的溶液成功回收mRNA。该方法非常简单,仅需要2-3分钟的额外时间,但可以处理大量的样品,并且该方法可并入到自动化系统中。因此,该方法有可能成为处理基因表达分析样品的标准方法,特别是对于RT-PCR。 |
申请公布号 |
CN1606621A |
申请公布日期 |
2005.04.13 |
申请号 |
CN01821394.4 |
申请日期 |
2001.10.25 |
申请人 |
日立化学研究中心;日立化成工业株式会社;株式会社日立制作所 |
发明人 |
M·米特苏哈施 |
分类号 |
C12N15/10;C12Q1/68 |
主分类号 |
C12N15/10 |
代理机构 |
中国专利代理(香港)有限公司 |
代理人 |
孟凡宏 |
主权项 |
1.一种检测细胞基因表达的方法,该方法包括:将细胞捕获在滤膜或膜上;使所述细胞与细胞膜透化溶液接触,以增加细胞膜的通透性;清洗细胞质;使洗去细胞质的细胞与细胞溶解溶液接触,以溶解细胞核,由此获得细胞核溶液;由所述细胞核溶液回收RNA;根据回收的RNA量确定细胞的基因表达。 |
地址 |
美国加利福尼亚州 |