一种检测马铃薯病毒的试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种检测马铃薯病毒的试剂盒及检测方法，该试剂盒由反应液、引物、酶液及阳性标准品组成，反应液由鼠源逆转录酶反应缓冲液、PCR反应缓冲液、dNTPs及灭菌水组成，引物为马铃薯病毒引物，阳性标准品为马铃薯病毒克隆质粒，酶液由鼠源逆转录酶、TaqDNA聚合酶、灭菌水组成，该检测方法是：从植物组织中提取总RNA；对总RNA进行一步法逆转录－PCR反应；PCR产物经电泳检测，本发明省去了现有方法中，先逆转录再PCR的步骤，节省时间并降低了试剂成本，并有特异性强，灵敏度高，结果准确，不需要大型设备仪器，操作简单，检测速度快，无放射性污染，价格低廉等优点。

主权项

1.一种检测马铃薯病毒的试剂盒，其特征在于，该试剂盒由反应液、引物、酶液及阳性标准品组成，所述反应液中的组分及体积百分比为5×鼠源逆转录酶反应缓冲液6％～50％、10×PCR反应缓冲液3％～25％、25mmol/L Mg2+ 2.5％～15％、各25mmol/L dNTPs 0.7％～10％、灭菌水87.8％～0，所述引物为马铃薯X病毒引物、马铃薯Y病毒引物、马铃薯S病毒引物及马铃薯卷叶病毒引物中至少一种，所述马铃薯X病毒引物由序列表中SEQ ID NO.1表示的马铃薯X病毒上游引物和由序列表中SEQ ID NO.2表示的马铃薯X病毒下游引物组成，所述马铃薯Y病毒引物由序列表中SEQ ID NO.3表示的马铃薯Y病毒上游引物和由序列表中SEQ ID NO.4表示的马铃薯Y病毒下游引物组成，所述马铃薯S病毒引物由序列表中SEQ IDNO.5表示的马铃薯S病毒上游引物和由序列表中SEQ ID NO.6表示的马铃薯S病毒下游引物组成，所述马铃薯卷叶病毒引物由序列表中SEQ ID NO.7表示的马铃薯卷叶病毒上游引物和由序列表中SEQ ID NO.8表示的马铃薯卷叶病毒下游引物组成，各上、下游引物的浓度为0.5～2μmol/L，所述酶液的组分及体积百分比为鼠源逆转录酶20％～50％、Taq DNA聚合酶20％～50％、灭菌水60％～0，所述阳性标准品为马铃薯X病毒克隆质粒、马铃薯Y病毒克隆质粒、马铃薯S病毒克隆质粒及马铃薯卷叶病毒克隆质粒中至少一种，并与马铃薯病毒引物相对应，每种病毒克隆质粒浓度均为107～1015copies/μl。