一种适用于农杆菌介导的早熟禾组织培养方法

摘要

本发明一种适用于农杆菌介导的早熟禾组织培养方法，专用于早熟禾农杆菌介导法基因转化。在愈伤组织诱导培养基中，固化剂—琼脂条的用量增加一倍，即由常规用量8g/L提高到16g/L，获得的浅黄色、干燥、颗粒状愈伤组织的数量占诱导产生的愈伤组织总数40％以上，适合用作农杆菌介导法基因转化的受体材料。用农杆菌介导法已分别将苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因(B.t基因)、葡萄糖氧化酶基因(GO基因)导入草地早熟禾“大青山”和“超级伊克利”两个品种，获得一批抗虫、抗病转基因工程植株。

主权项

1、一种适用于农杆菌介导的早熟禾组织培养方法，其特征在于，1)材料选用早熟禾的成熟种子为外植体材料；2)愈伤组织诱导培养基基本培养基为MS大量元素、微量元素，B5维生素，蔗糖30g/L；附加激素：2，4-二氯苯氧乙酸2.0mg/L，6-苄基氨基嘌呤0.2mg/L；培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8；琼脂条的用量为16g/L；3)培养方法将种子先浸泡在70％乙醇溶液中1～2min，再转到0.1％(质量比)HgCl2溶液中消毒15min，用无菌水冲洗3次后接种在愈伤组织诱导培养基上，培养室温度为26±2℃，在散射光下培养，25d后获得浅黄色、干燥、颗粒状愈伤组织，即为适用于农杆菌介导法基因转化的受体材料。