主权项 |
1、一种水华蓝藻制备藻蓝蛋白的方法,包括下列步骤:A、从富营养化水体中收获水华蓝藻,经浓缩、脱水分后得到鲜蓝藻藻糊;B、提取蓝藻蛋白粗提液:取蓝藻鲜藻,经脱水后,按鲜藻与磷酸缓冲液重量体积比1∶1-1∶10的比例加入0.05M-0.2M的磷酸缓冲液,pH 5.0-9.0,混匀,然后置-10至-20℃,冰冻,待冻结之后,取出置室温20-25℃下使之融溶,冻融处理3-5次,然后利用板框过滤或离心分离法,使粗提液与细胞碎片相分离而得到蓝藻蛋白粗提液;C、微滤、预处理:上步骤的蓝藻蛋白的粗提液,依次通过孔径为2-3μm和0.45-0.22μm的二种微滤器,进行微滤处理,控制压力在0.02-0.1Mpa以下;D、超滤纯化工序:选用截留分子量为1000-20万道尔顿的中空纤维超滤器与蠕动泵配套使用,处理经过微滤处理的粗提液,控制超滤的流量为1-5升/分钟,通过超滤,小分子量的杂蛋白,小分子的有机物,多肽,及其它无机小分子,包括分子量1千的蓝藻毒素,均透过超滤膜而被清除,而藻蓝蛋白及其它大分子则滞留在超滤膜内,藻蓝蛋白的纯度得以提高;E、静置—澄清纯化工序:经过超滤纯化的藻蓝蛋白部分,除去了分子量,浓缩,将浓缩后的藻蓝蛋白部分在3-5℃保藏2-3天后,经过1000-5000g离心或过滤处理;F、羟基磷灰石柱层析纯化工序:将通过静置—澄清纯化工艺处理的材料上羟基磷灰石柱,使柱的1/3着染,然后用0.001M-1M不同浓度的磷酸缓冲液分步洗脱,按磷酸缓冲液浓度高低依次选用浓度梯度,磷酸缓冲液使用剂量为1-3个柱体积,通过洗脱,在0.125-1M浓度的磷酸缓冲液洗脱时,灰蓝色蛋白的别藻蓝蛋白才洗脱下来。 |