衍生自牛脑的膜结合鞘磷脂酶,其分离方法和抗鞘磷脂酶单克隆抗体

摘要

公开了一种衍生自牛脑神经元膜的鞘磷脂酶,其分子量为60kDa,活性是Mg²⁺依赖性的,最适pH范围是6.0－9.0。其制备通过:牛脑组织匀浆,离心匀浆,除去细胞碎片和核;从上清液中将细胞膜作为沉淀通过离心分离出来;用含有硫酸铵的缓冲液处理该细胞膜沉淀,使鞘磷脂酶从膜上解离出来;对抽提液进行阴离子交换层析;层析组分在含有Triton X－100的缓冲液中超声,并对超声组分进行离心,获得含有鞘磷脂酶的上清液;以预定顺序对上清液进行疏水作用层析,阴离子交换高效液相层析,疏水作用高效液相层析和阳离子交换快速蛋白质液相层析,纯化了鞘磷脂酶。还公开了针对鞘磷脂酶,由杂交瘤SM1A5(保藏号KCLRF－BT－00025)产生的单克隆抗体。

主权项

1.一种衍生自牛脑神经元膜的鞘磷脂酶，其特征在于，该鞘磷脂酶分子量为60kDa，活性是Mg2+的，最适pH范围是6.0-9.0。