超声波辅助大豆原位丛生芽转化的方法

摘要

一种超声波辅助大豆原位丛生芽转化的方法，将种子经过消毒放在萌发培养基上萌发，取去除顶芽后的外植体，放在预培养基上预培养，在超声场中进行农杆菌感染，通过在一定的超声波条件下空气化效应过程中，气泡团闭合形成的瞬间高压造成许多微损伤，以避免刀割伤口对外植体造成的过度损伤，处理后取出放在共培养基上共培养，放在含有卡那霉素的除菌培养基上除菌，放在芽伸长培养基上筛选不定芽，然后诱导生根移栽。本发明采用农杆菌转化腋芽分生组织区的方式，在感染过程中采用超声波辅助转化的方法，从而提高转化率，得到较多的转化植株。

主权项

1、一种超声波辅助大豆原位丛生芽转化的方法，其特征在于具体包括如下 步骤： 1)大豆种子经过消毒，放在MSB+6-BA0.4mg/L(PH5.8)培养基上萌发5 天，去顶芽并制造伤口，得到外植体，放在MSB+6-BA10mg/L+IBA0.2 mg/L(PH5.8)培养基预培养一天； 2)置于100ml的三角瓶中，加入制备好的农杆菌菌液(OD_600nm≈0.5)， 三角瓶浸于功率500W，工作频率50kHz的超声波洗器中央，超声波 侵染处理15～20分钟，农杆菌感染10～20分钟，放在 MSB+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L(PH5.8)培养基上共培养3天，取 出放在MSB+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+头孢霉素300mg/L+羧苄青霉 素300mg/L(PH5.8)培养基上除菌2周； 3)除菌后的外植体放在MSB+卡那霉素80mg/L(PH5.8)培养基上，每2 周转接一次，进行筛选至出现不定芽，伸长到1～2cm时切除子叶， 至伸长到3～4cm； 4)切下外植体上的不定芽并放在1/2MSB+卡那霉素50mg/L(PH5.8)培养 基上，进行转化芽诱导生根15～20天，移栽到大盆直至获得转化植 株产生的种子，其中1/2MSB为MS培养基中的无机成分减半+B5培 养基中的有机成分。