重组人二连体干细胞因子及其制备

摘要

本发明属于生物技术中的基因工程制备多肽药物技术领域。其目的是构建一种新型融合型二连体干细胞因子基因，并在昆虫细胞中高效分泌表达和制备生物活性更高副作用更小的重组人二连体干细胞因子(rhdSCF)。rhdSCF基因为依次含有人SCF第1-165位氨基酸密码子，12个氨基酸连接肽和人SCF第1-145位密码子及终止密码的DNA片段。从Sf9细胞贴壁或悬浮培养液中制备的rhdSCF精品比活为2.8-2.9×10⁶单位/毫克。比E.coli生产的单体rhSCF精品比活高约6倍。它可用于放疗、化疗及骨髓移植后病人促进造血功能和免疫功能的重建和恢复，也可用于干细胞的体外扩增研究。

主权项

1.一种重组人二连体干细胞因子融合蛋白基因，其特征是设计并构建一个含可溶性人干细胞因子1-165位氨基酸的编码区，12个氨基酸GGGGSGGGGSGG柔性连接肽编码区与另一个可溶性人干细胞因子1-145位氨基酸的编码区及终止密码依次头尾共价连接的DNA片段，重组人二连体干细胞因子融合蛋白基因的核苷酸序列为：gaagggatct gcaggaatcg tgtgactaat aatgtaaaag acgtcactaa attggtggca 60aatcttccaa aagactacat gataaccctc aaatatgtcc ccgggatgga tgttttgcca 120agtcattgtt ggataagcga gatggtagta caattgtcag acagcttgac tgatcttctg 180gacaagtttt caaatatttc tgaaggcttg agtaattatt ccatcataga caaacttgtg 240aatatagtgg atgaccttgt ggagtgcgtg aaagaaaact catctaagga tctaaaaaaa 300tcattcaaga gcccagaacc caggctcttt actcctgaag aattctttag aatttttaat 360agatccattg atgccttcaa ggactttgta gtggcatctg aaactagtga ttgtgtggtt 420tcttcaacat taagtcctga gaaagattcc agagtcagtg tcacaaaacc atttatgtta 480ccccctgttg cagccggagg aggaggatcc ggaggaggag gctccggcgg cgaagggatc 540tgcaggaatc gtgtgactaa taatgtaaaa gacgtcacta aattggtggc aaatcttcca 600aaagactaca tgataaccct caaatatgtc cccgggatgg atgttttgcc aagtcattgt 660tggataagcg agatggtagt acaattgtca gacagcttga ctgatcttct ggacaagttt 720tcaaatattt ctgaaggctt gagtaattat tccatcatag acaaacttgt gaatatagtg 780gatgaccttg tggagtgcgt gaaagaaaac tcatctaagg atctaaaaaa atcattcaag 840agcccagaac ccaggctctt tactcctgaa gaattcttta gaatttttaa tagatccatt 900gatgccttca aggactttgt agtggcatct gaaactagtg attgtgtggt ttcttcaaca 960ttaagttagt aa相应的氨基酸序列为：Glu Gly Ile Cys Arg  Asn Arg Val Thr Asn  Asn Val Lys Asp Val  Thr Lys Leu Val Ala                  5                   10                   15                   20Asn Leu Pro Lys Asp  Tyr Met Ile Thr Leu  Lys Tyr Val Pro Gly  Met Asp Val Leu Pro                 25                   30                   35                   40Ser His Cys Trp Ile  Ser Glu Met Val Val  Gln Leu Ser Asp Ser  Leu Thr Asp Leu Leu                 45                   50                   55                   60Asp Lys Phe Ser Asn  Ile Ser Glu Gly Leu  Ser Asn Tyr Ser Ile  Ile Asp Lys Leu Val                 65                   70                   75                   80Asn Ile Val Asp Asp  Leu Val Glu Cys Val  Lys Glu Asn Ser Ser  Lys Asp Leu Lys Lys                 85                   90                   95                  100Ser Phe Lys Ser Pro  Glu Pro Arg Leu Phe  Thr Pro Glu Glu Phe  Phe Arg Ile Phe Asn                105                  110                  115                  120Arg Ser Ile Asp Ala  Phe Lys Asp Phe Val  Val Ala Ser Glu Thr  Ser Asp Cys Val Val                125                  130                  135                  140Ser Ser Thr Leu Ser  Pro Glu Lys Asp Scr  Arg Val Ser Val Thr  Lys Pro Phe Met Leu                145                  150                  155                  160Pro Pro Val Ala AlaGlu Gly Ile                165                  170                  175                  180Cys Arg Asn Arg Val  Thr Asn Asn Val Lys  Asp Val Thr Lys Leu  Val Ala Asn Leu Pro                185                  190                  195                  200Lys Asp Tyr Met Ile  Thr Leu Lys Tyr Val  Pro Gly Met Asp Val  Leu Pro Ser His Cys                205                  210                  215                  220Trp Ile Ser Glu Met  Val Val Gln Leu Ser  Asp Ser Leu Thr Asp  Leu Leu Asp Lys Phe                225                  230                  235                  240Ser Asn Ile Ser Glu  Gly Leu Ser Asn Tyr  Ser Ile Ile Asp Lys  Leu Val Asn Ile Val                245                  250                  255                  260Asp Asp Leu Val Glu  Cys Val Lys Glu Asn  Ser Ser Lys Asp Leu  Lys Lys Ser Phe Lys                265                  270                  275                  280Ser Pro Glu Pro Arg  Leu Phe Thr Pro Glu  Glu Phe Phe Arg Ile  Phe Asn Arg Ser Ile                285                  290                  295                  300Asp Ala Phe Lys Asp  Phe Val Val Ala Ser  Glu Thr Ser Asp Cys  Val Val Ser Ser Thr                305                  310                  315                  320Leu Ser