松材线虫检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明松材线虫检测试剂盒及其检测方法属于农林作物防病治病及植物检疫范畴。设计了两个引物对，P1/P3为松材线虫特异性引物对，P2/P3为拟松材线虫特异性引物对。试剂盒：1.25ml溶液I，(Worm Lysis Buffer，500mM KCl，100mM Tris－Cl pH8.0，15mM MgCl₂，10mM DTT，4.5％Tween 20，0.1％gelatin，0.2ug/ul蛋白酶K)，1ml溶液II(2×PCR反应Buffer，4.0mMMgCl₂，0.2mM dNTP，0.8μMP₁、P₂、P₃)，100U taq酶，线虫对照DNA各50ul。该检测试剂盒具较强的特异性、灵敏性及稳定性，提供了快速、灵敏、特异的技术方法。

主权项

1、松材线虫检测试剂盒，包括以下成分：1)松材线虫与拟松材线虫特异性引物序列：上游引物P1：5′-GATGATGCGATTGGTGACT-3′上游引物P2：5′-TGTTTGAGGAGTGCGTGCAC-3′下游引物P3：5′-TTTCACTCGCCGTTACTAAGG-3′其中P1/P3构成松材线虫特异性引物对，P2/P3构成拟松材线虫特异性引物对；2)1.25ml溶液I，内含1mlWLB和0.25ml1ug/ul蛋白酶K，其中1mlWLB(Worm Lysis Buffer)含有500mM KCl，100mM Tris-Cl pH 8.0，15mM MgCl2，10mM DTT，4.5％(质量比，下文同)Tween 20，0.1％明胶和水；3)1ml溶液II，内含2×PCR reaction Buffer，4.0mM MgCl2，0.2mM dNTP，0.8μM P1，0.8μMP2，0.8μM P3，100U taq酶，松材线虫和拟松材线虫对照DNA各50ul和水。