一种小分子核糖体失活蛋白

摘要

本发明涉及一种小分子核糖体失活蛋白-r-Cucurmosin，是从葫芦科植物南瓜种籽中分离出来的，其分子量为10 KD(用SDS-PAGE检测)。采用了简单、温和的提取方法，获得了高产率、高纯度、高活性的蛋白。该蛋白可以作为引产药物和抗肿瘤制剂的商业应用，并可用作免疫毒素的“弹头”材料。

主权项

1.一种小分子核糖体失活蛋白，其特征在于，它的分子量10KD，具有强烈抑制细胞内核糖体蛋白质合成的活性，该蛋白是由包括以下六个步骤分离得到的小分子核糖体失活蛋白：(1)南瓜籽经粉碎后，加磷酸盐缓冲液或者1.5％～3％醋酸抽提、匀浆两次，置4℃过夜；(2)用盐酸或醋酸调pH4.0或者用NaOH调pH5.0，静置多于2小时，高速离心得上清液；(3)进一步加固体硫酸铵分级沉淀，超速离心得40％～95％饱和度的硫酸铵沉淀；(4)上述硫酸铵沉淀对流水透析24小时或者对5mM磷酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液透析过夜，超速离心得黄色上清液；(5)黄色上清液上样CM-52纤维素柱，或是CM-Sephadex C25柱洗脱，用含0.3M NaCl的5mM磷酸盐缓冲液洗脱，280nM实时检测流出液，洗至基线后改用含1M NaCl的5mM磷酸盐缓冲液洗脱，合并该洗脱组分；(6)上述洗脱组分，对蒸馏水充分透析后，冷冻干燥得冻干粉，就是小分子南瓜蛋白。