一种基因芯片上的酶标信号检测方法

摘要

本发明公开了一种基因芯片上的酶标信号检测方法，涉及基因芯片信号检测技术领域。其步骤是制作好有关基因芯片；进行芯片生化反应，并在反应过程中引入生物素；芯片生化反应结束后，采用碱性磷酸酶-亲和素复合物或自行制备的碱性磷酸酶-连接肽-链霉结合肽-链霉亲和素复合物进行在片信号检测。在信号检测过程中，对酶标信号检测方法的反应条件进行优化，简化反应步骤，提高了信号检测的稳定性和重复性；通过采用自行制备的碱性磷酸酶-连接肽-链霉结合肽-链霉亲和素定向交联复合物进行信号检测，提高了信号检测灵敏度。本发明适用于中、低密度基因基因芯片的信号检测。

主权项

1、一种基因芯片上的酶标信号检测方法，该方法包括以下步骤： 1)制作基因芯片并进行芯片生化反应，在反应过程中引入生物素；具体包 括以下步骤： A.首先在普通载玻片上制作点阵；其次对载玻片进行巯基硅烷化修饰； B.合成相关引物，对引物的5’末端进行二硫键修饰；将修饰后引物固定 于载玻片，形成引物阵列，基因芯片制作完毕； C.在基因芯片上构建生化反应室，进行芯片生化反应，在反应过程中引入 生物素； 2)采用碱性磷酸酶-亲和素复合物，按下述步骤进行酶标信号检测： a)用溶液I37℃漂洗芯片5分钟，溶液I的组成成份为10mM Tris-Cl，pH7.5；150mMNaCl，0.05％Tween-20； b)以溶液II37℃封阻芯片10分钟，溶液II的组成成份为100mM Tris-Cl，pH7.5；150mMNaCl，50mg/mlBSA； c)用碱性磷酸酶-亲和素复合物在芯片上37℃作用10分钟，使其与芯片上 DNA中的生物素充分结合； d)用溶液I37℃漂洗芯片两次，每次10分钟； e)在芯片上滴加5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸/氯化硝基四氮唑蓝混合液，37℃ 下反应，30分钟内出现蓝紫色阳性结果。