Método, kit e iniciadores para a idendificação de sequências especificas de nucleotìdeos através da reação em cadeia da polimeras tipo nested em um único tubo de reação

摘要

"MéTODO, KIT E INICIADORES PARA A IDENTIFICAçãO DE SEQuêNCIAS ESPECìFICAS DE NUCLEOTìDEOS ATRAVéS DA REAçãO EM CADEIA DA POLIMERASE TIPO NESTED EM UM úNICO TUBO DE REAçãO". O objetivo da presente ínvenção é eliminar o risco de contaminação cruzada das misturas reacionais a serem utilizadas nos dois estágios da Reação em Cadeia da Polimerase tipo Nested através de um método simples e eficaz, onde não há comprometimento da especificidade e da sensibilidade do sistema quanto à amplificação e identificação da seq³ência específica de nucleotídeos. O método é caracterizado pela realização da PCR tipo Nested em um único tubo de reação, no qual os iniciadores internos são fixados, por evaporação, na face interna da tampa do tubo até o término da primeira fase de amplificação, quando é promovido o seu contato com a mistura reacional e, portanto, tem início a segunda etapa de amplificação. Adicionalmente, a invenção está relacionada a um kit para uso na amplificação e identificação de seq³ências de nucleotídeos específicas de seres humanos, plantas, animais e outros organismos unicelulares e pluricelulares. A invenção inclui ainda iniciadores específicos para Plasmodium sp. e Schistosoma sp.