无细胞百日咳抗原蛋白的分离纯化方法

摘要

本发明涉采用一种对百日咳包特氏杆菌培养液的上清液进行一步分离纯化百日咳抗原的方法。本发明的制备工艺采用经筛选的国产珍珠岩作为柱层析材料，样品经浓缩调整电导处理后，优化洗脱条件可一步分离纯化得到丝状血凝素(FHA)和百日咳毒素(PT)；经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS－PAGE)鉴定，纯度达85－95％。本发明的工艺方法大幅减化了纯化工艺步骤，节省了时间，省去相应的设备和价格昂贵的原料，不仅大幅度地降低生产成本而且显著提高了产品质量和收率，是一种简单、快速的无细胞百日咳疫苗的分离纯化方法。

主权项

1.一种无细胞百日咳抗原蛋白的分离纯化方法，包括如下步骤：(1)装柱：选取含SiO2 70-80％，Al2O3 10-20％的食用类中速型珍珠岩，颗粒范围在30-250μm，去除悬浮物和悬浊液后，用注射用水冲洗珍珠岩层析柱；(2)样品处理，加样：百日咳包特氏杆菌的培养液经高速离心去除菌体收集上清液，上清液经膜除菌过滤去除残余菌体，除菌后滤液经10-30KD膜包超滤浓缩至原体积的0.1-20％，浓缩液加入注射用水调整电导至2-4mS/cm，以线性流速小于300cm/hr通过珍珠岩层析柱；(3)洗脱：首先用50-60mM的Tris-HCl缓冲液，pH＝7.0-8.0，对珍珠岩层析柱进行洗脱，直至洗脱液的OD值为0-0.05；第二步用含有0.05-0.15M NaCl的50-60mM Tris-HCl缓冲液，pH＝7.0-8.0，对珍珠岩层析柱进行二次洗脱，直至洗脱液的OD值为0-0.05，收集第二步的洗脱液即为珍珠岩层析柱分离纯化的百日咳毒素；第三步用含有0.4-0.7M NaCl的50-60mM Tris-HCl缓冲液，pH＝7.0-8.0，对珍珠岩层析柱进行第三次洗脱，直至洗脱液的OD值为0-0.05，收集第三步的洗脱液即为珍珠岩层析柱分离纯化的丝状血凝素。