农杆菌介导的霉菌特别是属于曲霉菌属的霉菌的转化

摘要

本发明涉及农杆菌介导的霉菌包括真菌子囊菌、担子菌、半知菌、鞭毛菌和接合菌亚部的霉菌种的转化。实施例证明了泡盛曲霉(原生质体和分生孢子)、构巢曲霉、黑曲霉、盘长孢状刺盘孢、豌豆腐皮镰孢、粗糙脉孢菌、雷西木霉、糙皮侧耳和二孢蘑菇(均为分生孢子)、以及禾本科镰孢(分生孢子和重新水化的ATCC冻干物)的转化。尤其在泡盛曲霉中，转化频率远高于传统的霉菌转化技术。还进一步发现，不仅一个可表达的基因能被导入这些霉菌，甚至这种基因的多个拷贝也可以，而且，如同用泡盛曲霉所举的例子，这种基因可被定向至诸如染色体的pyrG位点中。这些多拷贝可以是一种编码一种所需的、同源或异源的蛋白的基因。

主权项

1.一种制备转化的霉菌的方法，其特征为：(1)首先将一种DNA片段克隆到一种根癌农杆菌载体上的T-DNA两边界之间，该DNA片段含有至少一个要被导入霉菌的可表达基因；(2)将在T-DNA两边界之间含有该DNA片段的载体导入一种在其DNA中含有一个vir区域的根癌农杆菌菌株；(3)通过加入一种vir诱导化合物使含有所说DNA片段的T-DNA从所说的根癌农杆菌中释放，并将根癌农杆菌菌株与需要转化的霉菌一起温育；并(4)根据导入DNA或其表达产物的特征将转化的霉菌从未转化的霉菌中选择出来。