| 主权项 |
1.一种具有提高活性之截短型葡聚醣,其具有由 序列辨识号码:3的第25个残基开始,由该残基向序 列办识号码:3之C端延伸,涵盖胺基酸残基总数介于 248至267之间之胺基酸序列 序列辨识号码:32.根据申请专利范围第1项之截短 型葡聚醣,其中该直线序列未包含PXSSSS重复序列 。3.根据申请专利范围第1项之截短型葡聚醣,其 中序列辨识别码3的胺基酸序列与沙斯诺金纤维分 解菌(Fibrobacter succinogenes)之野生型葡聚醣的胺 基酸序列相同。4.根据申请专利范围第3项之截短 型葡聚醣,其中该胺基酸序列是由序列辨识号码 :3的第25个残基开始,由该残基向序列办识号码:3之 C端延伸,涵盖少于267个胺基酸残基。5.根据申请专 利范围第4项之截短型葡聚醣,其中该胺基酸序 列涵盖了多于248个胺基酸序列。6.根据申请专利 范围第1项之截短型葡聚醣,其具有序列辨识号 码:1相同的胺基酸序列 序列辨识号码:17.根据申请专利范围第1项之截短 型葡聚醣,其具有序列辨识号码:2相同的胺基酸 序列 序列辨识号码:28.一种DNA片段,其具有起始密码子, 终止密码子,并在该两种密码子之间有一段编码序 列,该编码序列系编码根据申请专利范围第1项之 截短型葡聚醣之胺基酸序列。9.根据申请专利 范围第8项的DNA片段,其中该DNA片段具有与序列辨 识号码:4相同的核酸残基序列 序列辨识号码:410.根据申请专利范围第8项的DNA片 段,其中该DNA片段具有与序列辨识号码:5相同的核 酸残基序列 序列辨识号码:511.一种制备根据申请专利范围第1 项之截短型葡聚醣的方法,其包含: (a)在培养基中培养携带有沙斯诺金纤维分解菌来 源之野生型1,3-1,4--D-葡聚醣基因之细菌株, (b)将诱发剂添加到该培养基中以诱发该基因之表 现,并持续该步骤(a)之培养, (c)将该培养基离心以产生上清液, (d)将该上清培养液培育以制备截短型葡聚醣,该 截短型葡聚醣具有由序列辨识号码:3的第25个残 基开始,由该残基向序列办识号码:3之C端延伸,涵 盖胺基酸残基总数介于248至267之间之胺基酸序列, 和 (e)从该上清液收集和纯化该截短型葡聚醣。12. 根据申请专利范围第11项的方法,其中步骤(d)之该 上清培养液经在4℃或更高的温度培育至少7天。13 .根据申请专利范围第11项的方法,其中步骤(d)所指 之上清液经培育在4℃至37℃的温度范围下,经10天 到14天之期间范围。14.根据申请专利范围第11项的 方法,其中步骤(d)之该上清液系在37℃培育14天。15 .一种制备根据申请专利范围第1项之截短型葡聚 醣的方法,其包含: (a)用聚合链锁反应(PCR)方法,从含有沙斯诺金纤 维分解菌之野生型葡聚醣编码基因为DNA模版,增 殖放大DNA片段,该增殖后之DNA片段所编码之胺基酸 序列系由序列辨识号码:3的第25个残基开始,由该 残基向序列办识号码:3之C端延伸,涵盖胺基酸残基 总数介于248至267之间之胺基酸序列, (b)将该放大的DNA片段次选殖于表现型载体中, (c)将携带有该DNA片段之表现型载体转殖到宿主细 胞, (d)将该经转殖之宿主细胞培养在培养基中经一段 时间,并且于添加或不添加诱发剂下,诱发该DNA片 段的表现,以生产足量的蛋白质产物,并且 (e)从该培养基收集和纯化蛋白质表现产物。16.根 据申请专利范围第15项的方法,其中在步骤(a)中之 DNA模板与序列辨识号码:6的DNA序列相同 序列辨识号码:617.根据申请专利范围第15项的方法 ,其中该宿主细胞系选自细菌、真菌、酵母菌及其 它适合之宿主细胞系。图式简单说明: 图1是一个从以前发表之参考文献推论之pJI 10质体 的基因图谱,其包含沙斯诺金纤维分解菌之1,3-1,4- -D-葡聚醣全长之野生型酵素基因密码。 图2为本发明一个具体实例之TF-葡聚醣的胺基酸 序列(序列辨识号码:1),及其对应基因核酸序列( 序列辨识号码:4)。 图3为本发明另一个具体实例之PCR-TF-葡聚醣的 胺基酸序列(序列辨识号码:2),及其对应基因核 酸序列(序列辨识号码:5)。 图4是动力学数据,显示本发明的截短酵素具有比 野生型酵素和目前可获得之商品酵素更具优良之 酵素性质。 图5之数据显示本发明的截短酵素具有良好热稳定 性。 图6是由Teather和Erfle报导之野生型葡聚醣的胺基 酸序列(序列辨识号码:3),及其对应基因核酸序 列(序列辨识号码:6)。 |
