从啤酒废酵母中提取核苷酸的方法

摘要

本发明公开了一种从啤酒废酵母中提取核苷酸的方法。其步骤是先利用干燥的啤酒废酵母细胞已部分破裂的特性，基本上不用盐而将其中的核酸分解出来形成核酸液；然后不经过核酸沉淀的中间步骤，而直接利用磷酸二酯酶酶液对所得核酸液进行定向酶解，最后利用活性炭柱对所酶解的产物进行提纯而得到核苷酸成品。该方法具有工艺路线短、所提取的核苷酸产品得率高、纯度好、成本低，性能稳定等特点，且脱核后的酵母是优良的饲料，废酵母利用率高。

主权项

1.一种从啤酒废酵母中提取核苷酸的方法，包括以下步骤： 1)核酸液的提取：取干燥的啤酒废酵母与6～10倍体积的水混 合，搅拌成均匀的浆液，调节其pH值至7.2～7.5；然后将此浆液加 热升温至94～96℃，保持1.5～2小时；再将其降温至20℃～30℃， 并调节其pH值至4.8～5.0；最后对此浆液进行离心分离，分离出的 清液即为含有核酸的提取液，将此核酸提取液升温至80～90℃待用； 2)磷酸二酯酶酶液的制备：取重量为步骤1)所得核酸提取液 中纯核酸量2.8～3.2倍的、利用桔青霉菌种在麸皮上发酵而得的桔 青霉麸皮混合物，与9～10倍重量的水在40～50℃的温度下浸泡1～2 小时，然后降温至20～30℃，滤除固体霉，再升温使清液在70℃左 右保持4～6分钟后迅速降温至30℃左右，随后去除孢子，所得清液 即为磷酸二酯酶酶液； 3)混合酶解：将步骤1)所得的核酸提取液和步骤2)所得的磷 酸二酯酶酶液相混合，在65～75℃、pH值4.8～5.5的条件下水解1～ 2小时，再将其pH值调至7.2～7.8，并升温至90℃左右，保持12～ 15分钟后，迅速降温至30～40℃，去除其中的不溶物，所得清液即 为需要提纯的核苷酸粗液； 4)活性炭柱提纯：将步骤3)所得核苷酸粗液的pH值调节至1.5～ 3.0后上活性炭柱，以每毫升炭柱每分钟0.03～0.05毫升流出液的 流速上柱完毕，然后以同样的流速用软水洗脱去杂，再以同样的流速 换用由40～60％的酒精和0.5～1％的氨水组成的洗脱液进行洗脱，保 持炭柱在50～70℃恒温下洗脱，直至流出液经酒精检测无白色浑浊 为止，所得洗脱液即为浓度约为3～5％的核苷酸精液；保持此核苷酸 精液的温度为50～70℃，在真空条件下浓缩回收其中的酒精，使其 中核苷酸的浓度提高至9～12％；再调节此高浓度核苷酸液的pH值至 2.5～3.5，加入其体积量3～5倍的95％以上的酒精即得核苷酸沉淀； 将此沉淀真空干燥即得核苷酸成品。