一种玉米固相2DE总蛋白质的制备方法

摘要

本发明涉及玉米固相2DE总蛋白质的制备方法，首先遴选出纯化蛋白质的具有多效性的单一试剂；其次优化组配成研磨剂、纯化剂和提取剂；第三将纯化和提取同时进行。制备过程为：1)在植物材料中加植物组织研磨剂破碎植物组织和细胞，释放蛋白质，并使绝大多数蛋白酶变性失活；2)加研磨剂浸提，使不同试剂充分与不同非蛋白物质结合；3)加蛋白质提取液，离心，使蛋白质与非蛋白物质分离，沉淀；风干，获得含有植物部分组织的蛋白质干粉；4)提取液提取蛋白质；5)离心，上清中含蛋白质，分装，冷冻备用。本发明不含植物组织细胞裂解酶和蛋白质酶抑制剂，提取的蛋白质盐离子浓度低，脂肪、多糖、色素等浓度亦很低，能满足2DE对蛋白质纯度的要求。

主权项

1.一种玉米固相2DE总蛋白质的制备方法，其特征在于，首先遴选出纯化蛋白质的具有多效性的单一试剂；其次优化组配成工作液，试剂包括植物组织研磨剂I、II，蛋白质提纯液I、II、III和蛋白质提取液I、II；第三将纯化和提取同时进行，按以下步骤进行：1)在植物材料中加植物组织研磨剂I进行研磨，破碎植物组织和细胞，释放蛋白质，并使多种蛋白酶变性失活；2)加植物组织研磨剂II，研磨、浸提，使试剂充分与非蛋白物质结合；3)离心，使蛋白质沉淀，弃上液，风干，获得含有植物部分组织的蛋白质干粉；4)用蛋白质提取液从蛋白质干粉中提取蛋白质；5)离心，上清中含蛋白质，分装，冷冻备用；上述植物组织研磨剂I为：40mmol/L Tris；上述植物组织研磨剂II为：40mmol/L Tris，15％PVP，4％NP-40，0.075％DTT，D/R-Nase，各0.1g/L；上述蛋白质提纯液I为：丙酮，10％乙腈，10％三氯乙酸，0.075％DTT；上述蛋白质提纯液II为：丙酮，10％乙腈，0.075％DTT；上述蛋白质提纯液III为：丙酮；上述蛋白质提取液I为：40mmol/L Tris；上述蛋白质提取液II为：7M尿，2M硫尿，3％CHAPS，2％两性电解质pH3-10，1％DTT。