液体发酵法制作防治植物病虫害的真菌复合肥及其生产工艺

摘要

本发明属于微生物技术领域，主要内容是以哈茨木霉和绿色木霉为菌种，采取一步液体发酵法制备成真菌厚垣孢子复合肥的工艺，并将培养完成的厚垣孢子发酵液经过浓缩处理后，把两种有益真菌的浓缩孢子发酵液按一定比例与硅藻土或其它载物进行混合，成为最终产品。

主权项

1.一种液体发酵法制备真菌厚垣孢子复合肥的工艺，其特点在于以哈茨木霉和绿色木霉为菌种，采用如下步骤进行的：(1)培养皿菌种制备：将哈茨木霉和绿色木霉的纯菌株在无菌操作条件下分别接种在固体土豆汁培养基的平面上，然后将培养皿放入恒温培养箱中，在25～28℃条件下培养3～5天。哈茨木霉(Trichoderma harzianum Th-4)，菌种编号：CGMCC N0.0730，和绿色木霉(Trichoderma viride Tv-3)菌种编号：CGMCC N0.0731。固体土豆汁培养基配方如下： 土豆汁 20％ 蔗糖 0.2％ 琼脂 1.5％ PH值 自然(2)摇瓶菌种制备：根据权利要求(1)所述将培养皿制备的菌种在无菌操作条件下转移到装有1L真菌培养液的2L摇瓶中。将摇瓶放在摇床上，在23～27℃，转速180rpm的条件下培养4～5天，培养结束后可获得厚垣孢子液，厚垣孢子数为5×108～3×109/ml，真菌培养液的配方为： 玉米淀粉(北京淀粉厂) 2.5％/L 干酵母(北京燕京啤酒厂) 0.25％/L 液态复合肥(美国Actagro LLC.) 3％/L 添加剂(美国Ag Biosience Corp) 0.1％/L(3)一级种子制备：根据权利要求(2)所述配制相同的真菌培养液，将9立升的培养液放入16立升的一级种子发酵罐中，并加适量消泡剂(旅顺化工厂)然后进行高温(121℃)高压(15磅)蒸汽灭菌，灭菌时间为1小时，间隔24小时后再以同样的条件灭菌一次，待培养液冷却后将发酵罐的罐压调整为0，同时将无菌空气(0.2～0.4磅)通入权利要求(2)中所述的真菌培养摇瓶中，将1L厚垣孢子液转入到一级种子发酵罐中，在25～28℃，罐压为0.4～0.6Kg，空气量为1～1.2∶0.5～0.7/m3，转速为190～210rpm的条件下发酵培养3～4天，培养结束后可获得厚垣孢子液，厚垣孢子数为2×108～8×108/ml；(4)二级种子制备：根据权利要求(3)中所述配制相同的真菌培养液，将120L～150L的培养液放入250L的发酵罐中，并进行权利要求(3)中所述的灭菌消毒处理，然后通过无菌管道将一级种子发酵罐中的厚垣孢子液转入二级种子发酵罐中，在与权利要求(3)中发酵参数相同的条件下发酵培养4～5天，培养结束后可获得厚垣孢子液，厚垣孢子数与一级种子发酵液相似；(5)厚垣孢子生产：根据权利要求(3)中所述配制相同的真菌培养液，将1.2吨～1.5吨的培养液放入2.5吨的发酵罐中，并进行权利要求(3)中所述的灭菌消毒处理，然后通过无菌管道将二级种子发酵罐中的厚垣孢子液转入三级发酵罐中，在与权利要求(3)中发酵参数相同的条件下发酵培养4～5天，培养结束后可获得厚垣孢子液，厚垣孢子数与一级/二级发酵液相似。