组织型纤溶酶原激活剂的组合突变体

摘要

本发明从改造组织型纤溶酶原激活剂(简称t－PA)的天然分子结构入手，通过蛋白质工程改造，得到了t－PA的重组衍生物－组合突变体(简称rPA)。将t－PA分子中的EGF区、Finger区和Kringle I区删除，保留了具有溶栓作用的KringleII和蛋白酶二个功能区(176－527位氨基酸)，同时将t－PA分子中的126－128位氨基酸HRR突变为AAA，构建成新的t－PA组合突变体rPA。将rPA的cDNA插入酵母表达质粒中，转化毕赤酵母后经筛选得到高表达酵母工程菌，再经过表达和一系列纯化步骤，可以制备得到高纯度、高比活性的rPA。rPA在具有天然t－PA的优点，如血栓特异性的同时，还表现出显著增强的血纤蛋白刺激性，延长的半衰期，增加的酶原性以及提高的对PAI－1抑制的耐受性。因而可能成为具有诸多临床优势的新一代溶栓药物。

主权项

1.组织型纤溶酶原激活剂(简称t-PA)的组合突变体(简称rPA)。其特征在于将t-PA分子中的EGF区、Finger区和Kringle I区删除，保留了具有溶栓作用的Kringle II和蛋白酶二个功能区(176-527位氨基酸)，同时将t-PA分子中的126-128位氨基酸HRR突变为AAA。