主权项 |
1、齿梗孢霉醇提取物的制备方法,采用齿梗孢霉(Calcarisporium arbuscula)发酵培养,再制备醇提取物,其发酵培养工艺为(所述的比例均为重量百分比):(1)培养基的配制:采用液体发酵培养方法,培养基:葡萄糖1-3%;KH2PO4 0.1%-0.5%;K2HPO4 0.08%-0.3%;MgSO4 0.08%-0.3%;天然物:麦麸1%-5%(煮汁)或土豆10-25%(煮汁);(2)培养条件:培养基pH4-7;三角瓶摇床培养瓶装量20-60%;转速100-120转/分钟;温度:18-25℃;培养时间6-10天,发酵罐培养接种量5-10%,其余参数同上;醇提取物的获得:(1)将上述步骤所得发酵产物,用双层尼龙布过滤得到菌丝体和发酵液两部分;(2)菌丝体部分用清水洗2-3遍后,挤掉大部分水分,晾干,用甲醇、95%乙醇或丙酮等溶剂热提取,或用乙酸乙酯、二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇、氯仿、氯仿-甲醇或甲醇等溶剂超声、渗滤或浸泡提取,上述溶剂的加入量为菌丝体的3-6倍,减压浓缩提取物,水浴挥掉溶剂后,得到菌丝体醇提取物;(3)发酵液部分常压热浓缩或减压浓缩后,加入95%乙醇或无水乙醇进行醇沉,使得溶液中含有70%-80%的乙醇,震摇或剧烈搅拌后放置分层,收集上清液,沉淀部分加入95%乙醇或无水乙醇如前操作,反复3-5次,收集上清液,减压浓缩,水浴挥掉溶剂,得到发酵液醇提取物。 |