人血管内皮生长因子及其多克隆抗体的制备与真核表达载体的构建方法

摘要

人血管内皮生长因子及其多克隆抗体的制备与真核表达载体的构建方法。本发明涉及生物材料领域。本发明是将人血管内皮生长因子基因克隆至原核表达质粒中,并在大肠杆菌中大量表达并纯化,经免疫家兔,以得到特异性好,浓度高的抗体,从而能大量制备出廉价的、高质量的抗人血管内皮生长因子抗体。同时,采用分子克隆技术,将人血管内皮生长因子基因,反向克隆于其核表达载体pcDND3.1中,形成一种可用于疾病抗血管生成治疗的基因制剂。

主权项

1、人血管内皮生长因子及其多克隆抗体的制备与真核表达载体的构建方法，它至少包括，脐静脉内皮细胞培养、扩增、酶切、人血管内皮生长因子基因序列的测序及表达载体的构建，感受态细胞的制备与重组质粒的转化，重组克隆的筛选及酶切鉴定等步骤，其特征在于：所述人血管内皮生长因子和抗人血管内皮生长因子多克隆抗体的制备方法，其生产抗体包括在兔、羊、鼠等动物体内制备相应动物来源的抗人血管内皮生长因子多克隆抗体，并可在体内外特异性的与人血管内皮生长因子结合，同时，采用分子克隆方法将人血管内生生长因子基因反向克隆于表达载体pcDND3.1中形成一种用于抗血管生长的基因制剂。