靶向肝癌的乙肝病毒反义RNA表达载体及其构建方法与用途

摘要

靶向肝癌的乙肝病毒反义RNA表达载体及其构建方法与用途，属于乙肝病毒相关肝细胞肝癌的基因治疗物。本发明是以EB病毒表达质粒pEBAF为载体，由AFP启动子控制的、仅特异性表达于AFP阳性的肝癌组织表达载体，构建的三种HBV反义RNA表达载体pEBAF－as－preS2、pEBAF－as－preS1、pEBAF－as－X分别含有HBV preS2、preS1和X区段基因。反义RNA表达载体的制备方法，包括：扩增目的基因、设计引物，PCR扩增HBpreS2、HBpreS1、HBX基因，体外重组，包括目的基因与质粒DNA的酶切、纯化及连接、转化，含目的基因阳性重组子的筛选、鉴定，包括重组子质粒DNA的抽提、双轮PCR筛选及测序鉴定。本发明的反义RNA表达载体用于乙肝病毒相关肝细胞肝癌及慢性乙肝病毒感染的治疗物质。

主权项

1.靶向肝癌的乙肝病毒反义RNA表达载体，其特征在于是以EB病毒表达质粒pEBAF为载体，由AFP启动子控制的、仅特异性表达于AFP阳性的肝癌组织表达载体，构建的三种HBV反义RNA表达载体pEBAF-as-preS2、pEBAF-as-preS1、pEBAF-as-X分别含有反向插入的HBVpreS2(3203-340)、preS1(2301-2925)和X(1370-1873)区段基因。