| 摘要 |
<p>Es ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine Nachweismethode und eine Quantifizierungsmethode der 14-3-3-Proteine bzw. deren Isoformen zur frühzeitigen Diagnose von TSE-Erkrankungen zur Verfügung zu stellen, die es erlaubt, am lebenden Organismus die Diagnose durchzuführen. Ferner ist es das Ziel, eine Verunreinigung der Probe durch die parallele Bestimmung eines zweiten Antigens nachzuweisen. Diese Aufgabe wird erfindungsgemäss durch die Verwendung der biochemischen Eigenschaften der Vertreter der 14-3-3-Proteinfamilie gelöst, welche an bestimmte Aminosäuremotive wie X(n)-XSX(n)SXXSX-X(n) oder das Motiv RSXpSXP innerhalb von Peptiden oder Proteinen binden. Zur Bestimmung einer oder mehrerer Isoformen oder der Gesamtheit der 14-3-3-Protein(e) und zur spezifischen Bindung werden modifizierte Festphasen wie zum Beispiel Mikrotiterplatten verwendet, die mit einem künstlichen oder natürlichen Peptid beschichtet sind, welches ein Bindemotiv für 14-3-3-Proteine enthält, z.B. ein chemisch synthetisiertes Peptid mit dem Motiv CAALPKINRSApSEPSLHR. Nach Zugabe der zu untersuchenden Extrakte oder Körperflüssigkeiten erfolgt die Detektion und Quantifizierung der gebildeten Peptid-14-3-3-Protein-Komplexe mittels markierter Antikörper. Die erfindungsgemässe Anwendung er 14-3-3-Proteinfamilie und/oder einzelner Isoformen der 14-3-3-Proteine kann als Effektmonitor oder Biomonitor bei aquatischen Invertebraten nach Umwelteinflüssen wie polychlorierten Biphenyle (PCBs), (Xeno)Östrogene oder andere eingesetzt werden. Ferner kann das Verfahren zur frühzeitigen Diagnose von TSE-Erkrankungen wie zum Beispiel Creutzfeldt-Jakob-Krankheit (CJD) und deren neuer Form (Variante) bei jungen Menschen (vCJD) und Bovine Spongiforme Enzephalopathie (BSE) oder vergleichbar Erkrankungen eingesetzt werden. Damit steht ein Diagnosemarker (Surrogatmarker) zur Verfügung, der am lebenden Organismus als Screenings- Bestätigungs- oder Alleinmarker einsetzbar ist.</p> |
