| 主权项 |
1.一种用于增进调控剂转移至细胞之组合物,其包 含有效治疗量的治疗剂,该治疗剂系调配于含式I 化合物之医药学上的可接受的缓冲溶液中: 其中: n为2-8的整数;R为阳离子的基团或 X1系选自以下所组成之群: ;且X2及X3各自系选自由醣类基团, 所组成之群; 其中醣类基团系选自由戊糖单醣类基团、己糖单 醣类基团、戊糖-戊糖双醣类基团、己糖-己糖双 醣类基团、戊糖-己糖双醣类基团、及己糖-戊糖 双醣类基团所组成之群;当R不是阳离子的基团时, 其中X2及X3中有一为醣类基团。2.如申请专利范围 第1项之组合物,其中之化合物浓度为0.002至2毫克/ 毫升。3.如申请专利范围第2项之组合物,其中之化 合物浓度为0.02至2毫克/毫升。4.如申请专利范围 第3项之组合物,其中之化合物浓度为0.2至2毫克/毫 升。5.如申请专利范围第1项之组合物,其中之治疗 剂为蛋白质。6.如申请专利范围第1项之组合物,其 中之治疗剂为治疗基因。7.如申请专利范围第6项 之组合物,其中之治疗基因为肿瘤抑制基因。8.如 申请专利范围第7项之组合物,其中之肿瘤抑制基 因为p53。9.如申请专利范围第7项之组合物,其中之 肿瘤抑制基因为视网膜细胞瘤基因。10.如申请专 利范围第1项之组合物,其中组合物更进一步包含 聚合的基质。11.如申请专利范围第1项之组合物, 其中组合物进一步包含黏膜附着剂。12.如申请专 利范围第1项之组合物,其系用于一种对细胞施用 治疗剂的方法中。13.如申请专利范围第12项之组 合物,其中该细胞为组织。14.如申请专利范围第13 项之组合物,其中该组织为器官。15.如申请专利范 围第12项之组合物,其中该施用为膀胱内的给药。 16.一种如式I之传送促进化合物: 其中: n为2-8的整数;R为阳离子的基团或 X1系选自由以下所组成之群: ;且X2及X3各选自由醣类基团, 所组成之群; 其中醣类基团系选自由戊糖单醣类基团、己糖单 醣类基团、戊糖-戊糖双醣类基团、己糖-己糖双 醣类基团、戊糖-己糖双醣类基团、及己糖-戊糖 双醣类基团所组成之群;当R不是阳离子的基团时, 其中X2及X3中有一为醣类基团。17.如申请专利范围 第16项之化合物,其中阳离子的基团系由NMe3+及NH3+ 中选出。18.如申请专利范围第16项之化合物,其中 醣类基团包括一种或多种戊糖或己糖残基。19.如 申请专利范围第18项之化合物,其中醣类基团系选 自由戊糖单醣类基团、己糖单醣基团、戊糖-戊糖 双醣类基团、己糖-己糖双醣类基团、戊糖-己糖 双醣类基团、及己糖-戊糖双醣类基团所组成之群 。20.如申请专利范围第18项之化合物,其中醣类基 团为三醣类。21.如申请专利范围第12项之化合物, 其中X2及X3中至少有一为醣类基团。22.如申请专利 范围第16项之化合物,其中n是2或3。23.如申请专利 范围第16项之化合物,其中X1及X2均为 ,且X3为醣类。24.如申请专利范围第16项之化合物, 其中X1及X2均为 且X3为醣类基团。25.如申请专利范围第16项之化合 物,其中醣类基团为戊糖单醣类基团。26.如申请专 利范围第16项之化合物,其中醣类基团为己糖单醣 类基团。27.如申请专利范围第16项之化合物,其中 醣类基团为己糖-己糖双醣类基团。28.如申请专利 范围第16项之化合物,其中n为3,X1及X2均为 ,且X3为己糖单醣类基团。29.如申请专利范围第16 项之化合物,其中n为3,X1及X3均为 ,且X2为己糖单醣类基团。30.如申请专利范围第16 项之化合物,其中n为3,X1及X2均为 ,且X3为己糖-己糖双醣类基团。31.如申请专利范围 第16项之化合物,其中n为3,X1及X3均为 ,且X2为己糖-己糖双醣类基团。32.如申请专利范围 第16项之化合物,其系用于增进治疗剂之传送,其中 该治疗剂系于施用该化合物之后施用。33.一种式 II之传送促进化合物: 其中X1及X2系选自由下述所组成之群: ,且X3为醣类基团; 其中醣类基团系选自由戊糖单醣类基团、己糖单 醣类基团、戊糖-戊糖双醣类基团、己糖-己糖双 醣类基团、戊糖-己糖双醣类基团、及己糖-戊糖 双醣类基团所组成之群。34.如申请专利范围第33 项之化合物,其中X1及X2均为 ,且X3为葡萄糖基团。35.如申请专利范围第33项之 化合物,其中化合物为式III化合物:36.如申请专利 范围第33项之化合物,其中化合物为式IV化合物:37. 如申请专利范围第33项之化合物,其中化合物为式V 化合物:图式简单说明: 图1说明配方对腺病毒中介的基因传送之影响及膀 胱内给药后在老鼠膀胱上皮之表现。 图2说明膀胱内给药后膀胱上皮细胞之腺病毒导入 基因的表现。 图3说明膀胱内给药后,老鼠膀胱内剂量依存的腺 病毒导入基因的表现。 图4说明膀胱内给药后,用反转录聚合连锁反 应(RT-PCR)分析老鼠膀胱内重组的腺病毒导入基因 的表现。 图5说明病毒膀胱内给药后,重组的腺病毒导入基 因在膀胱、肾脏、及肝脏组织表现之时间进程。 图6说明膀胱内给药后,膀胱及肾脏均质液中存在 之重组的腺病毒导入基因DNA。 图7说明以Big CHAP(N,N,bis-(3-D-葡萄糖酸醯胺基丙基)- 乙醇醯胺(CALBIOCHEM Biochemicals, San Diego, California) 配方改进对膀胱上皮之基因传送。 图8说明于7 mM Big CHAP配方中以不同浓度之重组的 腺病毒,改进对膀胱上皮之基因传送。 图9说明以乙醇(ETOH)或Big CNAP配方,改进重组的腺病 毒导入基因在膀胱组织的表现。 图10说明以4 mM Big CHAP配方对肿瘤进行基因传送。 图11说明将导入基因传送至猪膀胱上皮。 图12说明p53在肿瘤组织之表现。 图13说明将基因传送至老鼠回肠之黏膜。 图14为老鼠之膀胱切片图,其中比较两种不同来源 之Big CHAP对于增加基因传送之能力。相较之下,下 行的Xgal染色较上行强,代表来自CALBIOCHEMB Big CHAP 较之来自Sigma的Big Chap((Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri)有较强之基因传送能力。 图15说明来自CALBIOCHEM及Sigma之Big CHAP的薄层色层 分析(TLC)。BC-Sigma的样品(图B)只有一个清楚的环带 ,而BC-CALBIOCHEM的样品(图A)则多出三个环带。 图16说明Big CHAP杂质之TLC。各行之标示如下:行1:Big CHAP (CALBIOCHEM);行2:杂质I;行3:杂质II;行4:混合杂 质II及III;行5:杂质III;行6:纯Big CHAP (CALBIOCHEM);行7 :Big CHAP(CALBIOCHEM)。 图17为老鼠的膀胱切片图,其中比较Big CHAP(Sigma) Big CHAP(CALBIOCHEM)及标准样品浓度增加和基因传送 能力增加间之关系。结果显示Big CHAP (Sigma)之浓度 越高,Xgal之染色越强,代表其基因传送能力越强。 图18为老鼠的膀胱切片图,其中评估纯化后之Big CHAP(CALBIO-CHEM)及Big CHAP(Sigma)其增加基因传送之 能力是否发生变化,并用未纯化的Big CHAP作为比较 的控制组。Xgal染色的强度代表各来源的Big CHAP经 管柱色层分析纯化后增加基因传送能力减低的程 度。 图19为老鼠的膀胱切片图,其中评估纯化后之Big CHAP(CALBIO-CHEM)及Big CHAP(Sigma)其增加基因传送之 能力是否发生变化,并与各来源之未纯化的Big CHAP 及杂质I以及杂质II和杂质III之组合相比较。6毫克 /毫升杂质II及杂质III之组合其Xgal染色强度代表基 因传送增加之程度。 图20为老鼠的膀胱切片图,其中其中评估纯化后之 Big CHAP(Sigma)其增加基因传送之能力是否发生变化, 并与重组纯化的Big CHAP(Sigma)、杂质II、及杂质III, 或合成的杂质II类似物相比较。纯化的Big CHAP ( Sigma)重组后,Xgal染色之强度代表基因传送之增加 程度。以Big CHAP(CALBIO-CHEM)作为控制组化合物。 图21为Syn3及两种水溶性Syn3类似物之构造。两种类 似物之Syn3结构区具有保存性该区域称为"A"。A-TMA 类似物以及A-MCI是在Syn3的在的乳糖部分经取代三 甲基氯化铵(A-TMA)或氯化氢(A-HCI)后形成。 图22为杂质1之构造及MALDI-MS、和1H-NMR分析。 图23为杂质2之构造及MALDI-MS、和1H-NMR分析。 图24为杂质3之构造及MALDI-MS、和1H-NMR分析。 图25为合成杂质2之路径。 图26为合成Syn3之路径。另一个合成Syn3之路径示于 图34。 图27A-图27C说明I3A(Syn3)增加腺病毒-中介的-半乳 糖表现。使用0.5毫克/毫升之I3A于7.8 mM Big CHAP( 图27A)下可得到高度之基因传送。比较之控制组为 :无I3A(图27B)以及7.8 mM Big CHAP Calbiochem Lot#679693(图27 C)之正控制。 图28A及图28B是基因传送促进I3A(syn3)活性之滴定结 果。和0.5毫克/毫升I3A之7.8 mM Big CHAP(图28B)相较之 下显示,I3A降低至0.25毫克/毫升之3.9 mM Big CHAP(图28A )后仍然有高度之基因传送活性。固定时,膀胱用0. 25毫克/毫升I3A处理较之0.5毫克/毫升I3A处理更不易 发炎。 图29A及图29B是比较I3A及Syn3基因传送活性。使用1 毫克/毫升I3A之0.1% Tween 80(图29A)可得到高度之- 半乳糖2.活性。大约等于1毫克/毫升Syn3之0.1% Tween 80(图29B)之基因传送活性。 图30A-D是比较Syn3于0.1% Tween 80或7.8 mM Big CHAP中其基 因传送之活性。使用1毫克/毫升Syn3之0.1% Tween 80( 图30A)其基因传送能力与0.5毫克/毫升Syn3之7.8 mM Big CHAP(图30C)相当。负控制组(无Syn3)为0.1% Tween 80(图 30B)或7.8 mM Big CHAP(图30C)。 图31A-D是比较相同浓度之Syn3于Big CHAP及Tween 80两性 介面活性剂中基因传送之活性。当0.5毫克/毫升Syn 3溶于7.8 mM Big CHAP(图31A)时,有非常高之基因传送活 性。相较之下Syn3之0.05% Tween 80(图31C)基因传送之 活性稍微下降,更多的区域无-半乳糖活性 。7.8 mM Big CHAP(图31B)及0.05% Tween 80(图31D)的负控制 组亦如图示。 图32A-F是Syn3处理后浸润之比较。低剂量之Syn3处理 时,膀胱之浸润成比例的较低。使用低Syn3浓度之 Big CHAP(图32A,B)或Tween 80(图32D,E)进行rAd对膀胱的感 染。以及只用两性介面活性剂(无Syn3)Big CHAP(图32C) 或Tween 80(图32F)对膀胱进行处理。 图33A-D显示Syn3之处理会引发细胞的浸润。病毒及 Syn3产生之浸润程度(图33A)和只有Syn3(图33B)所产生 之浸润程度相当,显示Syn3的处理能显着的引发浸 润。控制组为只有病毒处理之膀胱(图33C)或无病 毒/无Syn3(图33D)。 图34为合成Syn3类似物之路径。最后于DMF中反应24 小时后,将产物挥发乾燥,并用SiO2与DCM/MeOHM2O(60:35:5 )纯化。 图35是合成A-tma以及A-MCI之制程。 |
