| 主权项 |
1.一种具有刺激或增加巨噬细胞式血小板产生之 生物活性之mpl配位子类似物,其包含在如下所示之 包含至少7-151胺基酸序列之mpl序列具有下列(i)至( xvii)中任一件与糖化有关之改变: (i)Asn30,Thr32 (ii)Asn120,Thr122 (iii)Asn53,Thr55 (iv)Asn30,Thr32,Asn120,Thr122 (v)Asn54,Ser56 (vi)Thr163,Asn164 (vii)Asn30,Thr32,Asn55(i),Thr57,Asn120,Thr122 (viii)Asn30,Thr32,Asn55(i),Thr57,Thr163,Asn164 (ix)Asn82,Ala83 (x)Asn58,Thr60 (xi)Asn52,Thr54 (xii)Asn81,Thr83 (xiii)Thr163,Asn164,Thr166 (xiv)Asn30,Ser32,Asn120,Ser122 (xv)Asn55,Thr57 (xvi)Asn56 (xvii)Asn30,Thr32,Asn120,Thr122,Asn55,Thr57,Thr163,Asn164,Thr166 ; mpl配位子之序列如下:2.根据申请专利范围第1项中 之类似物,其系外源DNA序列在真核细胞中表现之产 物。3.根据申请专利范围第2项之类似物,其中该真 核细胞系哺乳类细胞。4.根据申请专利范围第3项 之类似物,其中该哺乳类细胞为CHO细胞。5.一种DNA, 其编码根据申请专利范围第1至4项中任一项之类 似物。6.一种用于刺激或增加巨噬细胞及/或血小 板产生之医药组合物,其包含治疗上有效量之根据 申请专利范围第1至4项中任一项之类似物及医药 上可接受之稀释剂、佐药或载体。图式简单说明: 图1显示天然人mpl配位子之DNA和胺基酸序列,包括 讯息(胺基酸-21至-1)及成熟接基酸序列(1-332)。 图2显示mpl配位子之DNA和胺基酸序列,相对应于连 结至21个胺基酸长讯息之胺基酸1-174之人成熟mpl 配位子序列。侧接编码区域之序列已分别在5'和3' 端上导入XbaI和SalI选殖部位。 图3显示以大肠杆菌和CHO表现mpl配位子之西方吸渍 法。MK代表Met-Lys,其加入mpl配位子之N-端供在大肠 杆菌中表现及可使用二切除,如细胞自溶C 。其中MK已经除去之分子称为des MK。以醣神 经胺糖和O-聚醣之处理经指出。 图4显示大肠杆菌和CHO表现之mpl配位子在正常小鼠 中体内之活性,以血小板数表示。数据指出醣化 mpl配位子(CHO物质)较非醣化(大肠杆菌)物质具更 优越之活性。此可为增加醣化物质之半生期之 结果。例如,CHO332代表在CHO细胞中表现之人mpl配位 子胺基酸1-332(图1)。 图5显示重组人mpl配位子和类似物4.6.7.9.10和11之COS 细胞上清液之西方吸渍分析。类似物之构筑系描 述于实施例4。类似物4.7.10具如较缓之胶运动性所 示之至少一个附加之醣链。类似物号相对应于表1 中所提供之类似物号(例如11相对应于类似物N11)。 在表1中控制组为N1。 图6显示重组人mpl配位子和类似物4.5.13.14和15之COS 细胞上清液之西方吸渍分析。类似物之构筑系描 述于实施例4。类似物4.13.14和15具如较缓之胶运动 性所示之至少一个附加之醣链。 图7显示人mpl配位子和所示之mpl配位子类似物之COS 细胞上清液在以N-聚醣处理后之西方吸渍分析 。结果指出类似物具差异性之醣化型态。 图8显示以mpl配位子类似物之人单核巨细胞生长生 物分析之结果。板A和D分别为正和负控制组。在 板A中呈像之井接受37.5微微克野生型(即天然序列) mpl配位子1-174COS-1调整之培养基及显示实质地单核 巨细胞生长。板D接受1.5微升COS-1假性调节之培养 基及显示无生长。板B和C分别为mpl配位子1-174类似 物7和10。板B接受9.0微微克mpl配位子COS-1调节之培 养基,而板C接受27微微克及两者显示良好之单核巨 细胞生长。 图9显示CHO mpl配位子1-174和类似物N4和N15之西方吸 渍分析(见表1)。较缓之胶动性展现类似物N4(4B)具1 个附加之寡醣,而类似物N15(15-8)具2个附加之寡醣 。 图10显示CHO细胞产生之mpl配位子类似物以或不以N- 聚醣如所示地处理之西方吸渍法。在以N-聚醣 之处理后较缓之胶动性展现N-键结寡醣之存在 。 图11显示自以不同形式,在不同剂量之下mpl配位子 处理之小鼠之血小板数。数据展现增加量之N-和/ 或O-键结之醣造成体内活性之增加。 图12显示COS产生之mpl配位子1-174与类似物N10.N15.N33. N39.N31.N35和N40一起之西方吸渍分析。添加N-键结醣 基部位之数且亦经指示。图显示增加N-键结部 位之数目降低mpl配位子之动性,因为增加量之N-键 结醣。 图13显示COS产生之mpl配位子1-174与类似物N15.N29.N30 和N38一起之西方吸渍分析。N-键结醣基链之数 目亦经指示。 |
