利用水禽制备多株抗体之方法

摘要

蛋鸭经肌肉注射抗原诱发抗体后收取所产鸭蛋，取出蛋黄后经一系列蛋白质纯化(如萃取、盐析及离心等)步骤再经疏水基胶体层析(hydrophobic ligand gelchromatoraply)及透析、脱盐、浓缩等过程再以SDS-丙烯醯胺胶体电泳(SDS-PAGE electrophoresis)分析可得纯度为96%以上之高纯度且不含Fc端之蛋黄免疫球蛋白(York IgY, Fc domain free; IgY(Fc-)。此IgY(Fc-)再以琼脂免疫电泳(agarose gel electrophoresis)、琼脂双向扩散分析(agarose gel double diffusion)及酵素免疫分析(Enzyme Immunoassay; EIA)测试抗体之专一性(specificity);及其稀释能力(dilution ability)。结果发现此种抗体制备方法不但可制成具高专一性及稀释能力之多株抗体，更可有效避免以往常存在以哺乳类为中间宿主所制成之多株抗体所产生之伪阳性反应。

主权项

1.一种利用水禽制备IgY(Fc)多株抗体之方法,包含 (a)以纯化之抗原(免疫原)注射至水禽; (b)再以不完全佐剂进行追加反应; (c)5-15天后,水禽的产蛋中即有多株抗体产生,其中 该水禽系选自母鸭、母鹅。2.如申请专利范围第1 项所述之利用水禽制备IgY(Fc)多株抗体之方法, 其中该注射方法包含肌肉、皮下、皮内、血管等 方法。3.如申请专利范围第1项所述之利用水禽制 备多株抗体之方法,其中该抗原包含人体免疫球蛋 白。4.如申请专利范围第1项或第3项所述之利用水 禽制备多株抗体之方法,其中所该抗原系选自 (a)哺乳类动物来源之蛋白质、贺尔蒙, (b)各种病毒, (c)细菌, (d)以基因工程制备得之重组蛋白、合成胜, (e)各种治疗用药、药物滥用药品之蛋白质结合物 。5.一种自水禽之产蛋中纯化IgY(Fc)多株抗体的 方法,包括: (1)以水为溶媒,自该产蛋之蛋黄中粗分离IgY:可使 用自来水、纯水蒸馏水去离子水,或为微酸(pH>5.1) 或含 0.05%以下non-ionic detergent水溶液或0.15-1.0M食盐水溶 液;磷酸盐缓冲液或Tris-buffer等; (2)添加硫酸铵,使达30-50%之饱和度或硫酸钠使达14- 20%(w/v)之浓度,两度重覆盐析法; (3)使用含疏水基胶体(hydrophobic ligand coupled to matrices)进行层析IgY: (a)自下列物质中选取所用之流水基胶体 Butyl sepharose Octyl sepharose Phenyl sepharose Alkyl superose Methyl metracrylate T-Butyl methacrylate (b)层析管柱之操作条件: (i)管柱平衡缓冲液在pH7.0-8.0; (ii)平衡缓冲液为带1.0M的硫酸铵或硫酸钠其电导 度为110-200ms/ml; (iii)洗脱方式可用梯度洗脱或单液洗脱: 梯度洗脱A液即前述b(ii), B液即不带盐之缓冲液, 单液洗脱:预先将A液及B液混合并调整其电导度为 45-80ms/ml。6.如申请专利范围第5项所述之自水禽之 产蛋中纯化多株抗体的方法,其中该产蛋为新鲜之 产蛋或经4℃保存之冷藏蛋。图式简单说明: 第一图:利用10%SDS-丙烯醯电泳(SDS-PAGE)配合commassie blue为染料,决定抗体分子量大小及分析纯度。 第二图:酵素免疫分析法测定抗体稀释能力。 第三图:琼脂免疫电泳图。此测定抗体之专一性( specificity)及纯度。