使用纯化的抗原特异性抗体快速检测肺炎链球菌的方法和材料

摘要

公开了一种从肺炎链球菌获得含蛋白质低于10%的C－多糖细胞壁抗原的方法。将如此获得的抗原和一间隔臂分子偶联,然后将后者的自由端和层析亲和柱偶联。然后利用该柱纯化肺炎链球菌的粗抗体,从而产生抗原特异性的抗体。将这些抗体的一部分和标记试剂偶联,当抗体和它们嵌入免疫层析试验装置第一区带中的抗原结合伙伴反应时,标记试剂显示可见的颜色变化。这些抗体的另一部分和该装置的观察窗反应区带结合。当液体样品,如病人尿、脑脊髓液或血液被加到第一区上时,抗体和标记试剂的偶联物和样品沿滤纸材料的流动条流到反应区,如果样品含有肺炎链球菌或其细胞壁抗原,则标记的偶联物、抗原和结合的抗体中形成了夹心,观察到颜色的变化。如此进行的免疫层析试验在约15分钟内完成。该试验可快速可靠的诊断各种肺炎链球菌引起的疾病状态,如肺炎、支气管炎、中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎和当该细菌引起的初次肺部感染持续3－5日不消除时常见的二级疾病状态。

主权项

1．一种从肺炎链球菌获得蛋白质低于10％的细胞壁C-多糖抗原的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(a)培养细菌一段必需的时间，以获得所需量的样品，并从中收集湿细胞沉淀形式的细菌细胞；(b)将湿细胞沉淀悬浮在碱性溶液中并混合；(c)用强酸将pH调节到酸性pH并离心；(d)分离步骤(d)的上清液，并将所述上清液pH调到大约中性；(e)用广谱蛋白酶制备物消化上述产物，以破坏剩余蛋白质；(f)用弱碱水溶液将pH调到碱性一侧；(g)在用弱碱溶液平衡的分子排阻柱上分离出基本无蛋白的糖或多糖抗原；和(h)合并第一峰中洗脱出的物质，将其pH调到约中性。