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Una célula manipulada por ingeniería metabolica que comprende piruvato-carboxilasa en donde la célula manipulada por ingeniería metabolica sobre-expresapiruvato-carboxilasa. El método para obtener esta célula comprende la introduccion de un fragmentode ácido nucleico y/o extrano que codifique unapiruvato-carboxilasa dentro de una célula hospedante, de tal manera que ocurra una sobreproduccion de piruvato-carboxilasa en dicha célula. Alternativamente,el ADN de una célula que endogenamente exprese una piruvato-carboxilasa puede ser mutado para alterar la transcripcion del gen piruvato-carboxilasa nativo, detal manera que cause una sobreproduccion de piruvato-carboxilasa en dicha célula. Generalmente el fragmento de ADN que codifica una piruvato-carboxilasaderivado de un organismo que endogenamente exprese la piruvato-carboxilasa, tal como Rhizobium etli o Pseudomonas fluorescens. Opcionalmente, la célulamanipulada por ingeniería metabolica sobre-expresa fosfoenol piruvato (PEP) carboxilasa además de la piruvato-carboxilasa. Preferentemente la célula manipuladapor ingeniería metabolica es una célula de C. glutamicum, E. coli, Brevibacterium flavum o Brevibacterium lactofermentum que expresa una piruvato-carboxilasaheterologa. Un método para producir una sustancia bioquímica derivada de oxalacetato incluye suministrar una célula que produzca dicha sustancia bioquímica;transformar la célula con un fragmento de ácido nucleico, el cual contiene una secuencia de nucleotidos que codifica una enzima que tienen actividad depiruvato-carboxilasa; expresar la enzima en la célula para causar la produccion incrementada de la sustancia bioquímica; y luego aislar la sustancia bioquímicade la célula. Un fragmento de ácido nucleico aisladode P. fluorescens util en el método para producir la célula manipulada comprende una secuencia quecodifica a una piruvato-carboxilasa. |
