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Se refiere a una secuencia promotora de la expresion de genes gram que puede ser utilizada para proteínas recombinantes tanto en microorganismos grampositivos o negativos. La secuencia promotora reivindicada tiene una fortaleza superior a una secuencia promotora conocida como es el tac y resulta en unmétodo eficiente para la produccion en gran escala de proteínas recombinantes. Otra característica importante de esta secuencia promotora es que puede expresargenes utilizando la ARN polimerasa de T7. Esto otorga a la secuencia promotora cierta independencia con relacion al huésped si es cotransformado con el gen dela ARN polimerasa de T7. Comprende la construccion de un vector con un gen sin su promotor original. En lugar de la secuencia promotora original se coloca unsitio de clonado multiple. Como reporter se utiliza el gen de la beta-lactamasa, debido a que posee un fenotipo fácilmente detectable y porque su productoes una proteína que se ubica en el periplasma de la bacteria. Posteriormente, se clonan y analizan las secuencias promotoras obtenidas mediante el armado de unvector con un gen reporter sin su promotor original. El vector construído se denomina pACPR33 y el gen reporter que se utiliza es el correspondiente a labeta-lactamasa. El funcionamiento del vector se verifica por el clonado del tac (promotor sintético lac-trp) en su sitio de clonado multiple. El vector pACPR33se utiliza para clonar promotores de E.coli a partir de secuencias aisladas de una digestion exhaustiva del ADN de fagos de Staphylococcus aureus. Los clonesobtenidos mediante este procedimiento se analizan para determinar su fortaleza mediante ensayos de actividad de beta-lactanasa por un método biologico (CIM) yun método iodométrico. El clon conmayor fortaleza, denominado clon212, se secuencia y subfragmenta por el método de amplificacion para determinar el menortamano de fragmento que conserva actividad promotora. Subsiguientemente, se verifica la capacidad del promotor 212 de utilizar lapolimerasa de T7 y produciruna molécula recombinante como interferon.
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