人血红蛋白(珠蛋白)α<SUB>1</SUB>基因和α<SUB>2</SUB>基因的检测技术

摘要

一种遗传检测方法，利用ＤＮＡ聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对人血红蛋白（珠蛋白）α_１基因和α_２基因缺失进行基因分型检测。本发明设计了三对排列顺序明确的扩增引物αｐ_１和αｐ_３，αｐ_１和αｐ_２，βｐ_１和βｐ_２，它们分别扩增Ｈｂα_１基因２７８ｂｐ、Ｈｂα_２基因片段６０３ｂｐ、Ｈｂβ基因片段４００ｂｐ；用扩增反应配套的实验技术即扩增反应的试剂体系及其反应程序进行扩增反应，产物用电泳方法检测，可以准确判断受检的人血红蛋白（珠蛋白）α_１基因和α_２基因缺失α基因的个数。对科学研究、医学检测都有重要意义。本发明检测灵敏、准确、操作简便、价格低廉。$#!

主权项

1.一种用DNA聚合酶链式反应技术，对人血红蛋白α1基因和α2基因缺失，进行基因分型检测的遗传检测方法，其特征在于： (1) 基因扩增的寡核苷酸引物及其顺序为： αp1：5’-CGG CTC TGC CCA GGT TAA GG-3’ αp2：5’-CCT TGG TCT GAG ACA GGT AAA CA-3’ αp3：5’-AGT GGG GCC GAG GGC CCA G-3’ βp1：5’-AAG GAG ACC AAT AGA AAC TGG GC βp2：5’-TCT CCC CTT CCT ATG ACA TGA AC； (2) 引物αp1和αp3扩增Hbα1基因片段278bp，αp1和αp2扩增Hbα2基因片段 603bp，βp1和βp2扩增Hbβ基因片段400bp； (3) 基因扩增试剂体系是在30-100μl反应体系中含有： Tris-HCl：10-50mmol/L pH=8.1-8.5；KCl：50mmol/L；MgCl2：0.5-3.0mmol/L； (NH4)2SO4：10-25mmol/L；明胶：200μg/ml；甲酰胺：4-8％；dNTPs：200-300 mmol/L；耐热DNA聚合酶：1-1.5U； αp1：0.25-0.50μmol/L；αp2：0.125-0.25μmol/L；αp3：0.125-0.25μmol/L； βp1：0.125-0.25μmol/L；βp2：0.125-0.25μmol/L； (4) 扩增反应的程序是： ①90-93℃ 变性3-10分钟，加酶打匀，离心； ②按90-93℃ 0.5-1分钟，50-60℃ 0.5-1分钟，68-72℃ 1-2分钟，做30-35个循 环： ③68-72℃保温3-7分钟后，取反应产物在含有EB的琼脂糖凝胶上电泳，紫外 灯下观察电泳带： (5) 检测特征是： ①若受检的人血红蛋白α基因，为α1基因或α2基因缺失的杂合子，则其α1基 因或α2基因片段的扩增产物电泳带的亮度，仅为血红蛋白β基因电泳带的亮 度一半以下： ②若受检的人血红蛋白α基因，为α1基因或α2基因缺失的纯合子，则扩增产物 电泳时，有β基因带，没有α1基因带或α2基因带； ③若受检的人血红蛋白α基因，缺失了3个α基因，则α1基因或α2基因片段扩 增产物电泳带只有一条，而且其亮度仅为β基因带的亮度一半以下； ④若受检的人血红蛋白α基因中缺失了4个α基因，则仅有β基因带，没有α1 基因带和α2基因带。