| 摘要 |
<p>L'invention concerne des matrices d'ARN viral recombiné à brin négatif qui peuvent être utilisées pour exprimer des produits géniques hétérologues et/ou construire des virus chimères. On a utilisé la polymérase virale de la grippe, préalablement appauvrie en ARN viral, pour copier des petites matrices d'ARN à partir de séquences codées par des plasmides. On a constaté que les produits d'assemblage matriciels ne contenant que la terminaison 3' de l'ARN génomique sont faciles à copier, ce qui montre que le promoteur se situe uniquement dans l'extrémité 3' à 15 nucléotides. On n'a pas copié les séquences non spécifiques aux extrémités du virus de la grippe et, contre toute attente, les ARN contenant des extrémités identiques à celles que l'on trouve dans l'ARNc sens plus on été copiées à faibles niveaux. On a ensuite défini la spécificité de la reconnaissance du promoteur sens du virus par mutagénèse dirigée. On a également constaté qu'un niveau accrû de protéine virale était nécessaire pour catalyser à la fois la synthèse d'ARN à amorce endonucléase coiffée et sans amorce à partir de ces matrices modèles et d'ARN à longueur génomique, ce qui indique que ce système reconstitué présente des propriétés catalytiques très similaires à celles des RNP virales natives. On a obtenu des niveaux d'expression élevés d'un gène hétérologue en utilisant les produits d'assemblage et méthodes décrits. On a illustré le système en utilisant le virus de la grippe et le virus respiratoire syncytial.</p> |
