摘要 |
L'invention concerne un procédé d'analyse de l'activité métabolique dans des cellules consistant à améliorer la rétention d'une molécule rapporteuse détectable uniquement dans des cellules intactes dans lesquelles une enzyme particulière est présente. L'invention concerne notamment des résultats de rétention améliorés obtenus à partir d'un procédé en deux étapes consistant à conjuguer des dérivés à substitution haloalkyle d'une molécule rapporteuse avec des peptides contenant de la cystéine intracellulaire, tout en débloquant la molécule rapporteuse. Le procédé d'analyse d'activité métabolique de cellules consiste à utiliser un substrat se présentant sous la forme: XR-RAPPORTEUSE-BLOC, dans laquelle -BLOC représente un groupe choisi pour être extrait par l'action d'un analyte spécifique, afin de conférer à la RAPPORTEUSE des propriétés spectrales différentes de celles du substrat, la -RAPPORTEUSE- représente une molécule qui, lorsqu'elle n'est plus liée au BLOC par une liaison BLOC-RAPPORTEUSE, présente des propriétés spectrales différentes de celles du substrat, et XR- représente une fraction haloalkyle pouvant réagir de manière covalente avec un thiol intracellulaire (Z-S-H) afin de former un conjugué thio-éther (Z-S-R). Après la pénétration du substrat dans les cellules, l'analyte extrait le BLOC afin de rendre la RAPPORTEUSE détectable par le changement de propriétés spectrales, et l'haloalkyle XR réagit avec le thiol intracellulaire afin de former le conjugué thio-éther à l'intérieur des cellules, lequel est bien retenu dans ces dernières. |