ELECTRO-BLOTTING OF ELECTROPHORETICALLY RESOLVED FLUORESCENT-LABELED SACCHARIDES AND DETECTION OF ACTIVE STRUCTURES WITH PROTEIN PROBES

摘要

On sépare des mélanges de saccharides en groupes ou en saccharides individuels et on les teste en vue de déterminer leur affinité pour des protéines particulières. La mise en oeuvre du procédé consiste à conjuguer des saccharides dans un mélange avec des fractions génératrices de charges et des fractions capables d'entrer en fluorescence telles que de l'acide sulfonique 4-amino-1-naphtalène (ASAN) afin de former des conjugués. On soumet les conjugés de saccharides à une résolution électrophorétique sur gels. Les bandes résolues de matière peuvent être vues à la lumière ultraviolette et elles sont électro-transférées sur des membranes de nylon chargées afin d'obtenir un enregistrement stable de la séparation électrophorétique. On met en contact les transferts (visibles à la lumière ultraviolette) sur les membranes en nylon avec des protéines particulières afin de déterminer l'affinité de liaison de ces protéines particulières vis-à-vis de saccharides particuliers sur la membrane en nylon. Les protéines sont de préférence liées à des étiquettes de sorte que la liaison des protéines aux saccharides peut être facilement détectée.