发明名称 带有麦芽糊精淀粉转移 活力之多及其制法
摘要 衍生自杆菌属微生物基因属之麦芽糊精淀粉转移( cyclomaltodextrin glucanotransferase(CGTase)基因的次序和麦芽糊精淀粉转移之胺基酸次序已测出。而利用体外基因工程学将带有麦芽糊精淀粉转移之重组 DNA引入枯草杆菌(Bacillus subtilis)或大肠杆菌(Escherichia coil)之微生物寄主中。此带有重组DNA之重组微生物则会自动地增生而分泌出大量的麦芽糊精淀粉转移。
申请公布号 TW133430 申请公布日期 1990.05.01
申请号 TW074105228 申请日期 1985.11.20
申请人 林原生物化学研究所股份有限公司 发明人 ㄐ修造;久保田伦夫;杉本利行
分类号 C07K15/04;C12N15/66 主分类号 C07K15/04
代理机构 代理人 林敏生 台北巿南京东路二段一二五号七楼伟成第一大楼
主权项 1﹒具有麦芽糊精淀粉转移 (CGTase)活力之 多 ,包括一者以上之部份胺基酸次序选 自于由下列所组成之族: (a)Asn-Lys-l1e-Asn-Asp- Gly-Tyr-Leu-Thr, (b)Pro-Val-Phe-Thr-Phe- Gly-Trp-Phe-Leu, (c)Val-Thr-Phe-l1e-Asp- Asn-His-Asp-Met-Asp-Arg- Phe, (d)l1e一Tyr-Tyr-Gly-Thr- Glu-Gln-Tyr-Met-Thr-Gly- Asn-Gly-Asp-PRO-Asn-Asn- Arg ,and (e)Asn-Pro-Ala-Leu-Ala- Tyr-Gly。 2﹒依申请专利范围所请之多 ,其中部份胺 基酸之次序为: (a)Asn-Lys-l1e-Asn-Asp- Gry-Tyr-Leu-Thr, (b)Pro-Val-Phe-Thr-Phe- Gly-Glu-Trp-Phe-Leu, (c)val-Thr-Phe-l1e-Asp- Asn-His-Asp-Met-Asp-Arg- Phe,- (d)I1e-Tyr-Tyr-Gly-Thr- Glu-Gln-Tyr-Met-Thr-Gly- Asn-Gly-Asp-Pro-Asn-Asn- Arg ,and (e)Asn -Pro-Ala-Leu-Ala- Tyr-Gly。 其乃位于靠近所述多 之N-终端之 次序。 3﹒依申请专利范围第1.项所请之多 ,其中 在SDS-聚内烯醯胺电泳上所示之分子量 为70,00010,000道耳顿。 4﹒依申请专利范围第1.项所请之多 ,其包 含N-终端之部份胺基酸次序为Ala- Cry-Asn-Len-Asn-Lys-Vsn- Phe-Thr。 5.依申请专利范围第4.项所请之多 ,其具 有下列之胺基酸次序: 6.依申请专利范围第4.项所请之多 ,其中 具有胺基酸次序为 Met-Arg-Arg- Trp-Leu-Ser-Leu-Val-Leu- Ser-Met-Ser-Phe-Val-Phe- Ser-Ala-l1e-Phe-I1e-Val- Ser-Asp-Thr-Gin-Lys-Val- Thr-Val-Glu-Ala之讯息多 乃位 于所述多 之N-终端上游。 7.依申请专利范围第4.项所请之多 ,其中 有N-终端之部份胺基酸次序为Ser- Pro -Asp-Thr-SeraVal-Asn- Lys-Leu。 8﹒依申请专利范围第1.项所请之多 ,其具 有下列胺基酸次序: 9﹒依申专利范围第8.项所请之多 ,其中胺 基酸次序为Met-Lys-Gln-Val- Lys-Trp-Leu-Thr-Ser-Val- Ser-Met-Ser-Val-Gly-l1e- Ala-Leu-Gly-Ala-Leu-Pro- Val-Trp-Als之讯息多 乃位于所述 多 之N-终端上游。 10﹒依申请专利范围第1.项所请之多 ,其 乃起始于可制造麦芽糊精淀粉转移 之微 生物。 11﹒依申请专利范围第1.项所请之多 ,其 乃起始于嗜热脂肪芽炮杆菌属之徵生物。 12﹒依申请专利范围第1.项所请之多 ,其 乃起始于芽炮杆菌属之微生物。 13﹒依申请专利范围第1.项所请之多 ,其 乃起始自于已引带有麦芽糊精淀粉转移 基因之重组DNA的重组微生物。 14﹒具有PVUII监识裂解位置及带有麦芽糊 精淀粉转移 活力的重组DNA,包括: DNA断片,其乃在试管中以监识 分 解可制造麦芽糊精淀转移 之给体微生物 的DNA而得; 载体断片,其中为用监识 裂解载体 而得,再将这些断片相黏接。 15﹒依申请专利范围第14.项所请之重组DNA ,其中所述之给体微生物是为杆菌属。 16.依申请专利范围第14.项所请之重组DNA ,其中所述之给体微生物是为选自于包合 嗜热脂肪芽抱杆菌和芽炮杆菌之族者。 17﹒依申请专利范围第14.项所请之重组DNA ,其具有监识裂解之位置乃示于图1,2 ,3或4中。 18﹒制备麦芽糊精淀粉转移 之方法,包括 : 以营养培养基培养重组微生物,已引 入具有PvuII监识裂解位置且带有麦芽糊 精淀转移腌基因之重DNA于其中,此重组 DNA乃由黏接在试管中以监识 分解可制 造麦芽糊精淀粉转移 之给体微生物的 DNA所得之DNA断片和以监识 裂解载体 而得之载断片而制得;以乃回收此聚集 之麦芽糊精淀粉转移 。 19.依申请专利范围第18.项所请之方法,其 中所述重组DNA具有如图1,2,3或4 所示之监 裂解位置。 20﹒依申请专利范围第18.项所请之方法,其 中所述之重组微生物为杆菌属或艾歇利菌 属。 21﹒依申请专利范围筑18.项所请之方法,其 中所述之重组微生物是为选自于由大肠杆 菌TCH2O1(FERM BP-2109))或大肠菌 MAH2(FERMBP-2110)组成之族者。 22﹒如申请专范围第18.项所请之方法,其中 所述重组傲生物是为选自于由枯草杆菌 MAU210(FERM BP -2111) 和枯草 TCU211(FERU BP-2112)所组成之族者。 23﹒制造淀粉转移产物之方法,包括使淀粉 物受具有麦芽糊精淀粉转 之多 的作 用;所述之多 包一者以上之部份胺基酸 次序乃选自于下列所组成之族者: (a)Asn-Lys-l1e-Asn-Asp- Gly-Tvr-Leu-Thr, (b)Pro-Val-Phe-Thr-Phe- Gly-Glu-Trp-Phe-Leu, (c)Val-Thr-Phe-Ile-Asp- Asn-His-Asp-Met-Asp-Arp- Phe, (d)lle-Tyr-Tyr-Gly-Thr- Clu-Gin-Tyr-Met-Thr-GIy- Asn-Gly-Asp-Pro-Asn-Asn- Arg ,and (e)Asn-Pro-Ala-Leu-Ala- Tyr-Gly。 24﹒依申请专利范围第23.项所请之方法,其 中所述之淀粉转移产物为环糊精。 25﹒依申请专利范围第23.项请之方法,其中 所述之淀粉物质乃在淀粉受体之存在下受 述之多 作用。 26﹒依申请专利范围第23.项所请之方法,其 中所述之淀粉物质是为选自于由淀粉,淀 粉 ,环糊精及其混合物组成之族者。 27﹒依申请专利范围第25.项所请之方法,其 中所述之淀粉受体为选自于由糖类甜化剂 ,配糖物及其合物所组成之族者。 28﹒依申请专利范围第25.项所请之方法,其 中淀粉转移产物为选自于由-葡基糖, -葡基史帝 (Stevioside),-葡基 人参 。 29﹒依申请专利范围第25.项所请之方法,其 中所述之淀粉转移被用为甜化剂。
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