| 主权项 |
1﹒一种由细菌细胞回收纯化的真核细胞生长 荷尔蒙或其相似体的方法,此细菌细胞可 经由嵌入之控制此荷尔蒙或其相似体生成 之DNA的表现而制造出此真核细胞生长 荷尔蒙或其相似体;此方法包含下列几个 步骤:a﹒打碎细菌细胞或其片断之细胞 壁,以制造一分解物(lysate); b﹒由分解物中分离含有颗粒状物及非溶 解物质的沈淀物;c﹒于适当的缓冲溶液 内制备分离出之沈淀物的悬浮液;d﹒处 理悬浮液以进行液体与固体间的接触;e ﹒由液体一固体接触后的悬浮液中将沈淀 物部分或完全分离;f﹒将此分离而得之 沈淀物溶解于适量的液中,并调整至适当 酸硷度,以形成一溶液;g﹒在适合的情 况下以超过滤使其他细胞成分与溶解荷尔 蒙或其相似体分开,生产含有荷尔蒙及其 相似体的过滤液及残留物,并且h﹒处理 此溶解荷尔蒙或其相似体以进一步纯化和 浓缩,并回收之。 2﹒依第1项所述之方法,其中之荷尔或其相 似体为动物生长荷尔蒙或其相似体。 3﹒依第2项所述之方法,其中之荷尔或其相 似体为牛生长荷尔蒙或其相似体。 4﹒依第3项所述之方法,其中之相似体有一 甲硫胺酸一天门冬酸一麸酸醯胺(met ─asp─gln)加于天然牛生长荷尔 蒙苯丙氨酸形胺基端。并且细菌细胞为大 肠杆菌,编号为ATCC39860号之 菌株。 5﹒依第3项所述之方法,其中之相似体有一 甲硫胺酸加于天然牛生长荷尔蒙苯丙氨酸 形之胺基端并且细菌细胞为大肠杆菌编号 为ATCC39785号之菌株。 6﹒依第1项所述之方法,其中荷尔蒙或其相 似体是人生长荷尔蒙或其相似体。 7﹒依第6项所述之方法,其中相似体有一甲 硫胺酸^14(Met^14)开端之天然 人生长荷尔蒙之氨基酸序列,并且细菌细 胞为大肠杆菌,编号为ATCC3938 6之菌株。 8﹒依第6项所述之方法,其中相似体有一胺 基端以甲硫胺酸为首的牛生长荷尔蒙之氨 基酸序列,且细菌细胞为编号ATCC3 9384之菌株。 9﹒依第2项所述之方法,其中之荷尔为猪生 长荷尔蒙或其相似体。 10﹒依第9项所述之方法,其中之相似体有一 甲硫胺酸加于天然猪生长荷尔蒙苯丙氨酸 形之胺基端且细菌细胞为大胶杆菌编号为 ATCC39804之菌株。 11﹒依第2项所述之方法,其中之荷尔蒙或相 似体为鸡生长荷尔蒙或其相似体。 12﹒依第11项所述之方法,其中相似体有一 甲硫胺酸加于天然鸡生长荷尔蒙苯丙氨酸 形之胺基端且此细菌细胞为大胶杆菌编号 ATCC39792号之菌株。 13﹒依第1项所述之方法,于步骤(a)之前 ,细菌细胞或其片断维持于发酵糊状物之 悬浮液中或悬浮于其中性酸硷値之合适缓 冲溶液中。 14﹒依第13项所述之方法,其中酸硷値约为 7﹒4。 15﹒依第1项所述之方法,于步骤(a)中, 细胞用机械方法打碎。 16﹒依第1项所述之方法,其中之分解物,在 颗粒状物质被分解出来前,以适当的去离 子水稀释。 17﹒依第1项所述之方法,于步骤(b)及( e)中之分离用离心法。 18﹒依第1项所述之方法,于步骤(b)及( e)中之分离用超滤法。 19﹒依第1项所述之方法,于步骤(d)之处 理另外包含了用悬浮液与适当酸之适当期 限的接触,此要能水解消化悬浮液中之 多醣。 20﹒依第19项所述之方法,其中适当的( 酵素)为溶解酸。 21﹒依第1项所述之方法,其步骤(d)中之 处理为使用超音波装置使液体与固体接触 。 22﹒依第1项所述之方法,进一步包含加适当 量的表面活性剂至悬浮液内,并于液体一 固体在悬浮液中接触(步骤(d))前, 使悬浮液培养一适当的时间。 23﹒依第1项所述之方法,于步骤(e),由 液体一固体接触悬浮液中部分或全部分离 出的沈淀物质,再悬浮于适当量的培养基 液内。如此得之悬浮液在适当情况下做液 体一固体接触,所得之沈淀物在溶解步骤 (f)之前由液体一固体接触悬浮液中分 离出来。 24﹒依第廿三项所述之方法,其中适当的培养 基为缓冲或非缓冲之水溶液。 25﹒依第廿三项所述之方法,其中所得之沈淀 物再做成悬浮液,液体一固体接触并至少 再分离一次。 26﹒依第1项所述之方法,其在步骤(f)之 溶解所用之适当酸于度约为9﹒0至12 ﹒0。 27﹒依第廿六项所述之方法,在溶解沈淀物后 (酸硷値约为9﹒0至12﹒0)酸的度 调至约10﹒5。 28﹒依第1项所述之方法,适当量及浓缩的硼 酸钠水溶液加入(f)步骤所之溶液中。 29﹒依第1项所述之方法,进一步包含,在适 当情况下用液体一固体接触溶液方法来澄 清由步骤(f)所得的溶液,在合适情况 下离心液体一固接触溶液,分离上清液并 过滤溶液以得含有荷尔蒙或其相似体之澄 清溶液。 30﹒依第1项所述之方法,其中步骤(g)的 超滤过用具有仅能通过100,000分 子量以下之适当过滤膜进行。 31﹒依第1项所述之方法,其中步骤(g)所 得之残留物于进行下一步骤(h)之前, 至少再进行一次超过滤。 32﹒依第31项所述之方法,其中残留物于再 超过滤之前,于适当酸硷度以适当的缓冲 液稀释之。 33﹒依第32项所述之方法,其中过适当酸硷 度约为9﹒0至12﹒0。 34﹒依第32项所述之方法,其稀释及超过滤 至少重覆一次。 35﹒依第31项所述之方法,其中残留物于超 过滤时维持定量体积杖。 36﹒依第35项所述之方法,其中固定残留物 体积进行之超过滤至少重覆一次。 37﹒依第1项所述之方法,其于步骤(h)中 对溶解荷尔蒙的处理包含离子交换色层分 析。 38﹒依第37项所述之方法,其中离子交换色 层分析用含氨之离子交换树脂行。 39﹒依第38项所述之方法,其中含氨之离子 交换树脂为二乙胺乙基一菌葡萄聚醣或二 乙胺乙基一西发路丝(diethyla mioethyl─dextran或─ Sepharose)。 40﹒依第1项所述之方法,其纯化之荷尔蒙或 其相似体用超过滤法浓缩。 41﹒依第1项所述之方法,其纯化之荷尔蒙或 其相似体进一步用透析纯化,随后以乾燥 法来纯化。 42﹒依第41项所述之方法,其中透析乃对含 有适当盐浓度之溶液进行。 43﹒依第41项所述之方法,其中适当的盐为 氢氧化铵或碳酸氢铵。 44﹒依第41项所述之方法,其中之乾燥用冷 冻乾燥。 45﹒依第41项所述之方法,其中之乾燥在适 当情况下用喷雾乾燥。 |
