| 摘要 |
Способ тестирования связывания мембранного белка с лигандами, включающий экспрессию рекомбинантного мембранного белка в клетках Е.coli в составе цитоплазматической мембраны, приготовление препарата сферопластов из клеток Е.coli путем пермеабилизации клеточной стенки, приготовление меченого лиганда, внесение сферопластов в лунки планшета, инкубацию сферопластов с меченым лигандом, детекцию на поверхности сферопластов комплекса мембранного белка с лигандом и измерение уровня флуоресценции на поверхности сферопластов методом флуоресцентной микроскопии, определение константы диссоциации Kd для комплекса мембранного белка с лигандом, проведение конкурентного вытеснения флуоресцентно-меченого лиганда с мембранным белком немеченым лигандом из комплекса с мембранным белком, определение константы IC50 для немеченого лиганда и расчет константы диссоциации Ki для немеченого лиганда. |
