一种重组人白细胞介素－11的制备方法

摘要

本发明涉及一种重组人白细胞介素-11(IL-11)的制备方法。本发明利用遗传密码具有兼并性的原理，设计了大肠杆菌偏爱密码子，PCR扩增的人IL-11cDNA片段与原核表达载体如pBV220组装成高效表达质粒pIL-11，转化大肠杆菌后用温度诱导IL-11基因表达，表达量达菌体总量蛋白的20％。工程菌经发酵扩增，破碎后提取包涵体，包涵体经纯化后用尿素溶解变性并采用凝胶排阻层析和阳离子交换层析二步法纯化产品，两步之间进行分子复性，加保护剂后制成药用冻干制剂。该制剂可治疗癌症化疗等原因引起的血小板减少症，减少出血等并发症。

主权项

1、一种重组人白细胞介素-11(IL-11)的制备方法，包括PCR引物设计、扩增的基因、表达质粒的构建、表达产物的纯化工艺，其特征在于：(1)5′端PCR引物及扩增cDNA 5′端序列为：5′-CG GAATTC ATG GGT CCA CCA CCT GGT CCA CCT其中下划线序列为EcoRI位点，(2)上述IL-11 cDNA与含有PL、PR启动子的原核表达载体pBV220组装成高效表达质粒pIL-11；(3)pIL-11转化大肠杆菌，用温度诱导IL-11基因的表达，产物以包涵体形式存在工程菌内；(4)通过发酵技术扩增工程菌，用2YT作基础培养基，在表达不同时机加氮源、碳源等营养素；(5)发酵后破碎菌体，纯化包涵体并用尿素溶解变性，随后采用凝胶排阻层析和阳离子交换层析二步法纯化产品，两步之间进行分子复性。