MASKING BACKGROUND FLUORESCENCE AND LUMINESCENCE IN OPTICAL ANALYSIS OF BIOMEDICAL ASSAYS

摘要

Bei einem Verfahren zur quantitativen optischen Analyse von fluoreszenzmarkierten biologischen Zellen (5) steht eine Zellschicht auf einem transparenten Träger am Boden (2) eines Reaktionsgefässes (1) mit einer den Fluoreszenzfarbstoff (4) enthaltenden Lösung (3) in Kontakt. Die Empfindlichkeit des analytischen Nachweises kann erheblich verbessert werden, wenn der Lösung (3) zusätzlich zu dem bereits vorhandenen Fluoreszenzfarbstoff (4) ein Maskierungsfarbstoff (9) hinzugegeben wird, welcher das Anregungslicht (6) für den Fluoreszenzfarbstoff (4) und/oder sein Emissionslicht (7) absorbiert und/oder wenn auf die Zellschicht am Boden (2) eine für die Lösung durchlässige, das Anregungslicht (6) oder das Emissionslicht (7) absorbierende und/oder reflektierende Trennschicht (10) aufgebracht wird. Dieses Verfahren kann auch zur Verbesserung der Empfindlichkeit bei der quantitativen optischen Analyse einer lumineszenten biologischen Zellschicht angewandt werden. Die Trennschicht (10) muss in diesem Fall so beschaffen sein, dass sie ein hohes Reflexionsvermögen für das Lumineszenzlicht (11) besitzt. In analoger Weise können diese Verfahrensprinzipien auch bei Rezeptorstudien zur Maskierung der störenden Hintergrundstrahlung bei der quantitativen optischen Analyse von Fluoreszenz- oder Lumineszenz-markierten Reaktionspartnern angewendet werden. In diesem Fall steht eine Rezeptorschicht (12) am Boden (2) eines Reaktionsgefässes (1) mit einer Lösung (Überstand 3) in Kontakt, in der ein fluoreszierender oder lumineszierender Ligand (13) gelöst ist. Die Empfindlichkeit und Genauigkeit des analytischen Nachweises können dabei erheblich verbessert werden, wenn dem Überstand 3 ein Maskierungsfarbstoff (9) hinzugegeben wird, welcher das Anregungslicht (6) für den Fluoreszenzfarbstoff und/oder sein Emissionslicht oder (im Falle von lumineszenten Liganden) das Lumineszenzlicht absorbiert. Anstelle des Maskierungsfarbstoffes in der Lösung (3) oder ggf. als zusätzliche Massnahme kann auf die Zell- bzw. Rezeptorschicht (12) am Boden (2) eine für die Lösung (3) durchlässige, das Anregungslicht (6) und/oder das Emissionslicht bzw. das Lumineszenzlicht absorbierende und/oder reflektierende Trennschicht (10) aufgebracht werden.