一种单引物引发的核酸恒温扩增方法

摘要

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种单引物引发的核酸恒温扩增方法。本发明所要解决的技术问题是提供一种单引物引发的核酸恒温扩增方法，避免了现有技术的传统恒温检测方法中引物设计复杂，检测成本高等缺点。本发明提供的技术方案为一种单引物引发的核酸恒温扩增方法，通过对引物序列的设计使得引物在与目标核酸配对后自身互补配对，形成茎环结构继而从目标核酸上脱离，在切刻酶和聚合酶共同作用下不断产生核苷酸片段。本发明技术方案可在等温条件下完成，仅仅利用可保持恒定温度的设备就可得以施行，操作方便；扩增过程中只需一条引物，从而使检测方案更加简便易行，提高了核酸扩增及检测的效率。

主权项

一种引发核酸恒温扩增的单引物，其特征在于：(1)引物至少含有a、b’、x、c四个区，其中b’区和a区的5’侧相连，x区和b’区的5’侧相连，c区和x的5’侧相连；(2)a区是和靶标核酸互补配对的核苷酸序列，b’区是与该引物延伸合成反应产物的3’末端区域互补的核苷酸序列，x区包含切刻酶的识别位点和切刻位点核苷酸序列，c区是利用其合成的互补核酸进行信号检测的核苷酸序列；(3)引物a区聚合延伸形成b区，形成的a+b区在反应温度下与模板核酸动态解离；(4)引物延伸形成的b区与引物原有序列发生折叠互补配对，形成自身茎环结构；(5)形成的茎环结构3’端在聚合酶作用下延伸形成切刻酶切刻位点。