基于磁珠法的高效血浆细胞游离DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种基于磁珠法的高效血浆细胞游离DNA的提取方法。本发明所提供的高效血浆细胞游离DNA提取方法，包括：1)配置预处理液P对血浆样品进行预处理；2)配置结合液B，在两步温控条件下采用羟基磁珠特异性吸附样品中的DNA；3)配置洗涤液W1和W2对吸附有DNA的磁珠进行清洗；4)在物理强化作用辅助条件下实现样品高效洗脱。该方法能高效、快速地获得高质量的细胞游离DNA，可以满足PCR扩增、定量和定性分析、测序等分子生物学实验的要求。

主权项

一种基于磁珠法的高效血浆细胞游离DNA提取方法，其特征是，具体包括如下步骤：(1)预处理，取血浆样品置于离心管中，加入预处理液P，对血浆样品进行预处理；(2)配置结合液B，在两步温控条件下采用羟基磁珠特异性吸附样品中的DNA；(3)洗涤，配置洗涤液W1和W2对吸附有DNA的磁珠进行清洗；(4)加入洗脱液T，在物理强化作用下辅助洗脱，经过充分混合洗脱后，进行磁珠分离，然后用移液器吸取上清液体，此液体即为提取的血浆细胞游离DNA，所述的物理强化作用为漩涡震荡、超声波、高温中的一种或多种组合；其中，预处理液P：0.5‑3％(w/v)蛋白酶K，1‑3mM氯化钙；磁珠悬浮液：20％(w/v)纳米磁珠；结合液B：92‑98％(v/v)异丙醇，1‑3％(v/v)非极性溶剂，1‑5％(v/v)磁珠悬浮液；洗涤液W1：5‑20mM三羟甲基氨基甲烷，1‑5mM乙二胺四乙酸，60‑75％(v/v)乙醇；洗涤液W2：70‑80％(v/v)乙醇；洗脱液T：8‑10mM三羟甲基氨基甲烷，pH＝8.0。