聚乙二醇修饰的含脱氢酶生物硅凝胶的制备方法

摘要

本发明公开了一种经聚乙二醇修饰的含脱氢酶生物硅凝胶的制备方法。属于酶的凝胶包埋固定化技术。该方法包括以下过程：在磷酸盐缓冲液中，加入脱氢酶和能与酶分子上赖氨酸残基反应的SS－PEG、SC－PEG聚乙二醇衍生物修饰剂，制得PEG修饰剂修饰的脱氢酶溶液；在水中，以正硅酸甲酯、正硅酸乙酯或正硅酸异丙酯为前驱体，加入PEG修饰剂，以盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、氢氧化钠、氨水、磷酸盐、醋酸盐为催化剂，制备PEG修饰剂修饰的二氧化硅溶胶；将PEG修饰后的脱氢酶溶液与PEG修饰剂修饰的二氧化硅溶胶混合，得到PEG修饰的含脱氢酶生物硅凝胶。本发明的优点在于凝胶的平均孔径较大，固定化后酶的空间结构维持率和酶活性维持率高，固定化过程简便易行。

主权项

1.一种经聚乙二醇修饰的含脱氢酶生物硅凝胶的制备方法，其特征在于包括以下过程：1)在浓度为1～10mg/mL的磷酸盐缓冲液中，加入脱氢酶及与酶分子的质量比为1～3的能与酶分子上赖氨酸残基反应的SS-PEG、SC-PEG聚乙二醇衍生物修饰剂，在反应温度为25℃和pH值为7.0的条件下，制得PEG修饰剂修饰的脱氢酶溶液；2)在水中，加入与水的摩尔比为0.05-0.10的正硅酸甲酯、正硅酸乙酯或正硅酸异丙酯前驱体，并加入与上述前驱体的摩尔百分比为0.5～5％的分子量为200～5000的PEG修饰剂，及加入与上述前驱体的摩尔比为1.0～2.0的盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、氢氧化钠、氨水、磷酸盐、醋酸盐催化剂，在反应温度20～25℃，pH值在7.0的条件下，水解和缩聚反应制得PEG修饰剂修饰的二氧化硅溶胶；3)将步骤1)得到的PEG修饰后的脱氢酶溶液与步骤2)得到的PEG修饰剂修饰的二氧化硅溶胶混合，在1分钟之内形成凝胶，静置5～7天得到PEG修饰的含脱氢酶生物硅凝胶。