工程化的亚胺还原酶和用于酮和胺化合物的还原胺化的方法

摘要

本申请提供了具有亚胺还原酶活性的工程化的多肽、编码所述工程化的亚胺还原酶的多核苷酸、能够表达所述工程化的亚胺还原酶的宿主细胞以及使用这些工程化的多肽与一系列酮和胺底物化合物制备仲胺和叔胺产物化合物的方法。

主权项

一种工程化的多肽，包含与SEQ ID NO:6的参考序列具有至少80％序列同一性以及以下特征中的至少一个的氨基酸序列：(i)与SEQ ID NO:6的参考序列相比在选自以下的位置处的残基差异：X12、X18、X26、X27、X57、X65、X87、X93、X96、X126、X138、X140、X142、X159、X170、X175、X177、X195、X200、X221、X234、X241、X242、X253、X254、X257、X262、X263、X267、X272、X276、X277、X278、X281、X282、X291和X352，任选地其中在所述位置处的残基差异选自X12M、X18G、X26M/V、X27S、X57D/L/V、X65I/V、X87A、X93G/Y、X96C、X126S、X138L、X140M、X142A、X159C/L/Q/V、X170F/K/R/S、X175R、X177R、X195S、X200S、X221F、234C/L、X241K、X242C/L、X253K/N、X254R、X257Q、X262F/G/P/V、X263C/D/E/H/I/K/L/M/N/P/Q/V、X267E/G/H/I/N/S、X272D、X276L、X277H/L、X278E/H/K/N/R/S/W、X281A、X282A/R、X291E和X352Q；(ii)选自以下的与SEQ ID NO:6的参考序列相比的残基差异：X20V、X29K、X37P、X74W、X82C/T、X94N、X108S、X111A/H、X141M/N、X143F/L/Y、X153E/F、X154C/D/G/K/L/N/S/T/V、X156H/L/N/M/R、X157F/Q/T/Y、X158I/L/R/S/T/V、X163V、X197V、X201I、X220C/K/Q、X223S、X256A/E/I/L/S/T、X259C/R、X260A/D/N/Q/V/Y、X261E/F/H/L/P/Q/Y、X264V、X270L、X273C、X274L/S、X279T、X284C/F/H/P/Q/S、X292E/P和X295F；和/或(iii)选自以下的与SEQ ID NO:6的参考序列相比的两个或更多个残基差异：X153Y、X283V、X82P、X141W、X154F、X259I/L/M、X274L/M和X296N/V；其中所述多肽具有亚胺还原酶活性。